胃癌中微淋巴管密度检测的意义(一)

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【摘要】 目的 利用淋巴管内皮生长因子受体3(VEGFR?3)检测胃癌组织内微淋巴管密度(MLD)，研究其与增殖期细胞核抗原(PA) 及临床因素之间的相关性。方法 采用免疫组化法，以VEGFR?3 (又称FLT?4) 为标记物，检测60例胃癌淋巴结转移组织内MLD与增殖期细胞核抗原(PA) 蛋白及临床病理因素之间的相关性。结果 胃癌淋巴结转移组织VEGFR?3阳性率和MLD明显增高;胃癌组织中MLD与PA之间呈正相关。结论 VEGFR?3可促进肿瘤微淋巴管生成,VEGFR?3和MLD的表达可能与胃癌的淋巴结转移相关。

【关键词】 胃癌;淋巴管内皮生长因子受体3;微淋巴密度

　　ABSTRACT：Objective To detect the lymphatic microvessel density(MLD) in gastric cancer by lymphatic endothelial growth factor receptor3(VEGFR?3) and to study the correlation between the proliferating cell nuclear antigen(PA) protein and clinicopathological factors.Methods VEGFR?3 was used as a marker to detect the expression of MLD and PA protein in 60 cases of gastric cancer tissues by immunohistochemical method.Results The positive rate of VEGFR?3 and MLD were significantly increased in gastric cancer with lymph node metastasis,and there was a positive correlation between.MLD and PA in gastric cancer.Conclusion VEGFR?3 might promote micro?tumor lymphangiogenesis,and VEGFR?3 and the expression of MLD may be related to lymph node metastasis of gastric cancer.

　　KEY WORDS：Gastric cancer;Lymphatic endothelial growth factor receptor 3;Lymphatic microvessel density

　　肿瘤的侵袭和转移是患者死亡的重要原因之一。胃癌早期以淋巴转移为主，晚期才发生血行转移。尽管淋巴管在胃癌转移中的作用非常明确，但因长期未发现明确的淋巴管内皮标记物和淋巴管生成因子，使人们对胃癌淋巴管生成(lymphangiogenesis)的研究相对滞后于胃癌血管生成(angiogenesis)。淋巴管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor?3，VEGFR?3)是VEGF基因家族成员VEGF?C的受体，主要在淋巴管内皮细胞和单核细胞系造血细胞中表达。因此，VEGFR?3可作为淋巴管内皮细胞的标记物，以区别于血管内皮细胞[1,2]。本实验采用免疫组化法和图片分析法，检测胃癌组织中VEGFR?3和微淋巴管密度(microlymphatic density，MLD)的表达并探讨其与增殖期细胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen，PA)及临床病理因素之间的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　选择1999～2002年在咸宁学院附属第一医院手术切除的胃癌标本共60例，并取距离癌组织>5cm的正常组织作对照。患者中男48例，女12例，年龄32～76岁，平均58岁。标本均经10%的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。

　　1.2 实验试剂与材料

　　兔抗人VEGFR?3多克隆抗体、小鼠抗人PA单克隆抗体、即用型链酶亲合素?生物素?过氧化物酶复合物试剂盒。试剂盒组成(福州迈新公司)：A：内源性过氧化酶阻断剂(无色)，B：动物非免疫血清(羊，蓝色)，C：生物素标记的羊抗鼠/兔IgG(黄色)，D：链霉素抗生物素蛋白?过氧化物酶(红色)。试剂盒不含酶底物显色剂及复染剂。

　　1.3 方法

　　按试剂盒说明书方法操作。

　　1.4 结果判断

　　VEGFR?3蛋白主要表达于胃癌细胞及正常胃黏膜上皮细胞的胞质和(或)细胞膜上。测微淋巴管密度(MLD) ,先在低倍镜(SP×200) 视野下观察，选择VEGFR?3 阳性细胞最多的3个视野, 然后分别在高倍镜(SP×400) 视野下计数。染色的单个游离内皮细胞(排除肿瘤细胞或其他基质细胞)计为1条微淋巴管，成簇状相连或形成管状结构的细胞团计为1条微淋巴管，有血管平滑肌的管状结构不计入内。取其中计数最多的1个高倍镜视野内的微淋巴管数作为该组织的MLD。

　　PA 采用免疫反应半定量评分[3]。按染色强度评分: 0分为无染色,1分为染色较弱(浅黄色) , 2分为中等强度染色(棕黄色) , 3分为强染色(棕褐色)。按染色细胞的百分比评分:0分为无阳性细胞,1分为染色细胞<10%, 2分为染色细胞在11%～50%之间, 3分为染色细胞在51%～80%之间, 4分为染色细胞>80%。两种评分相乘即得出免疫反应评分, 范围在0～12分之间。

　　1.5 统计学处理

　　对MLD、PA行Kolmogorov?Smirnov Z检验。不符合正态分布，故用中位数(四分位间距)表示，采用Mann?Whitney U检验;相关性检验采用Spearman等级相关及单因素Logistic回归分析，给出OR 值( 95%可信区间)。所有统计采用SPSS10.0软件进行计算。