高脂血症对孕期大鼠急性胰腺炎的影响(一)
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【摘要】 目的：探讨高脂血症对孕期大鼠急性胰腺炎(AP)的影响。方法：妊娠大鼠随机分为实验组(高脂饲料)和对照组(均衡饲料)，分别喂养16d后，用L-精氨酸盐酸盐(L-Arg)溶液(250mg/100g)进行腹腔注射，1h后再次腹腔内注射(200mg/100g)。计算48h内大鼠死亡率，分别于末次注射后0、12、24和48h检测血清甘油三酯(TG)、淀粉酶(AMS)和脂肪酶(LPS)；计算胰腺湿/干重比值；观察胰腺组织的病理变化并评分，免疫组化SP法检测胰腺组织Bax表达。结果：实验组死亡率8.3%，对照组0.0%。实验组TG较对照组明显升高(P0.05)；实验组AMS、LPS峰值分别在24、12h出现，对照组都在24h出现且明显较实验组低(P0.05)。在L-Arg末次注射后12、24h，实验组胰腺湿/干重比值较对照组升高(P0.05)，胰腺水肿出血、炎症浸润也较对照组更重，病理评分更高(P0.05)。Bax表达的峰值提早出现，且比对照组高(P0.05)。结论：高脂血症能使L-Arg诱导的孕期AP提前出现，在此过程中凋亡基因Bax可能参与诱导胰腺腺泡的凋亡，从而减轻胰腺炎的严重程度。
【关键词】 孕期；高脂血症；急性胰腺炎；精氨酸
〔Abstract〕Objective: To study the influence of hyperlipemia on acute pancreatits(AP)of rats during pregnancy. Methods: SD rats in pregnancy were randomly divided into the test group and the control group，fed for 16 days separately. Rats in pregnancy were given intraperitoneal injection with L-arginine for 2 times(the first time 250 mg/100 g,the second time 200 mg/100 g)at an interval of one hour. After the last injection, the mortality of rats in pregnancy within 48 hours calculated. The serum triglyceride(TG)、serum amylase(AMS)、lypase(LPS)from blood samples and wet/dry ratio of pancreas were tested at the point of 0、12、24 and 48 hours. The pancreatic histopathological score based on microscopic changes was eva luated. The expression of Bax protein was determined by SP immunohistohemical technique. Results: After the last injection, the mortality of the test group was 8.3%, but 0.0% of the control group. The level of TG in the test group was higher than that of the control group. AMS、LPS in the test group peaked at 24- and 12-hour individually while AMS、LPS in the control group both peaked at 24-hour and lower than that of the test group obviously(P0.05). pared with the control group, the wet/dry ratio of pancreas of test group increased at 12- and 24-hour(P0.05). The pathological changes of pancreas of test group were more serious and the pancreatic histopathological score was also higher, with the expression of the Bax protein serious, too. Conclusion: L-Arg-induced-AP during pregnancy would appear ahead of schedule becasuse of hyperlipemia. Bax gene may contribute to acinar cell apoptosis and reduce the severity of AP.
〔Key Words〕pregnancy;hyperlipemia；acute pancreatitis；L-arginine
急性胰腺炎(AP)的发病率呈逐年上升趋势〔1〕，妊娠合并AP不多见，但其具有发病急、死亡率高的特点，对母婴有极大的危害。妊娠合并AP的病因目前尚不清楚,有研究显示,妊娠合并AP者，血清胆固醇、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、脂蛋白均明显增高，临床发现，12％～38％的AP患者伴血脂异常升高〔2，3〕，在某些家族性高脂血症患者和妊娠高脂血症患者中常反复发生AP。一般认为，当Ⅰ,Ⅳ,或Ⅴ型(Fredrickson?s分类)高脂血症患者在血清TG达到(11～22)mmol/L或以上可直接诱发AP〔4〕。那么通常的高脂饮食所致的高脂血症(TG较正常高3倍左右)是否会诱发妊娠期AP？还是其发生的一个危险因素？本实验将对此进行探讨。
1 材料与方法
1.1 动物
健康性成熟SD大鼠雌性48只(体质量180～220g)，雄性24只(体质量220～250g)，均由汕头大学医学院实验动物中心提供。
1.2 试剂与仪器
L-精氨酸盐酸盐(L-Arg)，分析纯级(BBI公司，加拿大)。使用时用体积分数0.9%的NS配成质量分数20%的L-Arg溶液(pH＝7.0)。Bax抗体免疫组化染色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司，中国)，盒中抗体为兔抗Bax(Santa-Cruz公司，美国)。CX9全自动生化分析仪、电热恒温干燥箱、低温高速离心机(贝克曼公司，美国)，1604型精密电子天平(上海实验仪器厂，中国)，SPOT及IPP图像采集分析系统(Media Cyberics公司，美国)。
1.3 方法
1.3.1 动物分组及模型制备
大鼠按雌雄比(2∶1)合笼进行交配，饲养于标准动物房(22℃)，给予规律光照(12h∶12h)，自由饮食。发现有阴道栓后记为妊娠第1d，并随机分为实验组〔高脂饲料(83％的均衡饲料，15％的猪油，2％的胆固醇)〕和对照组(均衡饲料)，每组24只。所有大鼠在实验前禁食12h，自由饮水。两组分别喂养16d后，用L-Arg溶液先于腹腔内注射(250mg/100g)，1h后，再次腹腔注射(200mg/100g)。
1.3.2 标本制备
两组分别于末次注射L-Arg溶液后0、12、24和48h各取6只处死(如处死时未发现大鼠怀孕，不纳入实验)，取门静脉血，分离血清，-70℃冰箱保存。同时切取大鼠胰腺组织，一分为二，一部分备于胰腺湿/干比率测定，另一部分用多聚甲醛固定，石蜡包埋，备用于组织病理学检查及免疫组化检测。
1.4 观察指标
1.4.1 两组死亡率
观察两组在注射后各时间点的死亡情况并计算其死亡率。
1.4.2 血清TG和淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)
用CX9全自动生化分析仪检测。
1.4.3 胰腺湿/干重比值
两组大鼠于各时间点处死后，切取的胰腺组织于电子天平上称重(湿质量)；再将切取的胰腺组织于60℃烘干24h，至质量不变为止(干质量)，计算湿/干重比值。
1.4.4 胰腺组织Bax表达
采用免疫组化SP法，其操作步骤严格按SP免疫组化染色试剂盒说明进行，结果判断：胰腺细胞胞浆染色呈棕褐色或棕黄色为阳性细胞。免疫组化结果用SPOT及IPP图像采集分析系统处理，40×10视野下观察采集图像，Imageproplus4.1版专业图像分析软件处理结果，以平均光密度值表示Bax表达的相对强度，由病理科医生进行双盲检验。
1.4.5 胰腺组织病理学改变及病理评分(表1)
石蜡切片，苏木精-伊红染色，光镜下观察其病理改变，并按照Schmidt镜下病理评分标准〔5〕由病理科医生进行双盲评分。表1 胰腺组织病理评分标准（略）
1.5 统计学处理
全部数据以x±s表示，计量资料结果采用SPSS11.0软件进行方差分析；组织病理学评级比较采用秩和检验，检验水准为α=0.05。