角黄素对D(一)

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【关键词】 丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化酶；角黄素

　　摘要： 目的 研究角黄素对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响。方法 用D-半乳糖注射Wistar雄性大鼠5个月，建立衰老模型。对致衰老模型组、角黄素组肝脏、肾脏、心脏、脑和前列腺等脏器丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性进行测定及比较。结果 角黄素组各脏器MDA含量均比模型组降低，差异有统计学意义(P001)，而SOD、GSH-Px酶活性比模型组升高，差异有统计学意义(P001)。结论 摄入适量角黄素可有效增强大鼠机体抗氧化能力，从而延缓D-半乳糖诱发的大鼠衰老。

　　关键词： 丙二醛；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽过氧化酶；角黄素

　　Effects of canthaxanthin on antioxidantive action in D-galactose induced aged rats

　　Abstract： Objective To study the influence of canthaxanthin on the antioxidantive function of D-galactose induced aging rat.Methods To cause aging,Wistar rats were given injections of D-galactose for 5 months.Then they were randomly divided in four groups，including model group,low-does canthaxanthin group,middle-does canthaxanthin group and high-does canthaxanthin group whose the content of malonic aldehyde(MDA) and the activity of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-Px) of different viscera(liver,kidney,heart,brain,prostates,etc)were tested and pared.Results pared with model group,the content of MDA in the canthaxanthin group had statistical significance and to be significantly decreased(P0.01).However,the activity of SOD and GSH-Px had statistical significance and to be significantly raised(P0.001).Conclusion Canthaxanthin can increase antioxidantive function of rat to stay D-galactose induced consenescence.

　　Key words： malonic aldehyde(MDA)；superoxide dismutase(SOD)；glutathione peroxidase(GSH-Px)；canthaxanthin

　　D半乳糖衰老机制是指在一定时间内，给动物连续注射大剂量的D-半乳糖，使机体细胞内半乳糖浓度增高。在醛糖还原酶的催化下，还原成半乳糖，此物质不能被细胞进一步代谢而堆积在细胞内，影响细胞的正常生理代谢，导致机体衰老〔1〕。角黄素是一种酮基类胡萝卜素，主要以全反式异构体形式存在于自然界的海洋动物体、藻体及少数陆生植物体内并具有多种生物学功能，其中尤以抗氧化、防止心血管疾病、提高免疫力和抗癌作用突出〔2〕。本实验旨在通过角黄素对D-半乳糖诱导大鼠衰老模型各脏器丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性进行测定，并与模型组进行比较研究此类化合物对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响。

　　1 材料与方法

　　11 主要仪器和试剂 Labconco冰冻真空干燥仪(法国乐高公司)；752分光光度计、AE100电子天平(中国伯乐公司)；电热三用水箱、KA1000型台式离心机(中国杭州华亭公司)；960型荧光分光光度计、J2-SH高速冰冻离心机(日本岛津公司)；C30柱(YMC Carotenoid S5，Waters)，高效液相色谱(HPLC)(Waters 600E溶剂输送系统，PDA2996二极管阵列检测器Waters)，MDA、SOD和GSHPx测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)；角黄素乳化剂(瑞士罗氏公司)；乙腈、甲醇、甲基叔丁基醚(MTBE)(美国迪马公司)；无水乙醇(北京化学试剂公司)；大孔吸附树脂(天津农业股份公司)。

　　12 乳化剂破乳制备角黄素

　　121 角黄素萃取 称取10g乳化颗粒加入300ml丙酮-正己烷萃取。静置2h后，将脂溶性相收集后进行提取液浓缩处理。

　　122 角黄素提取液柱色谱纯化 (1)装柱：将活化好的氧化铝装填于玻璃层析柱中，用正己烷润湿。(2)洗脱：分别取2ml角黄素提取液上柱，用50ml正己烷丙酮淋洗，收集洗脱液，用氮气吹干制粉。

　　13 角黄素鉴定 根据其HPLC中保留时间和紫外可见吸收光谱的特征峰与标准品对照进行鉴定。

　　14 动物实验

　　141 D半乳糖致衰老动物模型的建立 6周龄Wistar雄性大鼠75只随机分为5组，即致衰老模型组、青年对照组和角黄素组(低、中、高剂量组每天每只分别以02ml灌喂10，15，20mg/(kg?bw)，每组15只。另购16月龄同品系大鼠15只作为正常老年对照组。致衰老模型组和各剂量角黄素组每天用15g/(kg?bw)的D半乳糖颈背部皮下注射，剂量为01ml/10g。青年对照组注射等量的生理盐水，每天1次，连续注射5个月，自由进食进水。实验结束时称量鼠的体重并取各组人鼠，称重后乙醚麻醉，暴露腹部，下腔静脉取血，待测血清MDA含量，血中SOD和GSHPx活性；分离各组大鼠的肝脏、肾脏、心脏、脑和前列腺等脏器，测定各脏器匀浆MDA含量和SOD、GSHPx酶活性。

　　142 生化指标测定 MDA含量测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法；SOD活性测定采用亚硝酸盐法；GSH-Px活性测定采用5，5-双硫代对硝基苯甲酸(DTNB)显色法。

　　15 统计分析 采用SPSS110软件进行齐性检验并作方差分析。