维药祖发奇尼的抗菌和解痉作用实验研究(一)
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作者：尹龙萍 邓毅 姚雷 赵爱华 贾伟
【关键词】 神香草；,,抗菌；,,解痉
摘要：目的研究人工种植维药祖发奇尼（神香草）精油和水提物抗菌作用及精油的解痉作用。方法分别以最低抑菌浓度法和滤纸片扩散法比较评价神香草精油和水提物抗菌作用，以卡巴胆碱（carbachol，h）和组胺（histamine, His）致气管平滑肌收缩，观察神香草精油的解痉作用。结果神香草精油比水提物表现出更为显著的抗菌效果，其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的MIC分别为0.1，0.2，0.4 μg/ml。精油对由卡巴胆碱和组胺引起的离体鼠气管平滑肌的收缩表现出显著的舒张作用，IC50分别为9 μg/ml和0.3 μg/ml。结论 人工种植维药祖发奇尼在抗菌和解痉方面均表现出显著的药理活性，为维医用药提供了科学依据；同时提示在开发抗呼吸道感染和哮喘药物方面，其精油具有潜在的价值。
关键词：神香草； 抗菌； 解痉
Abstract：ObjectiveTo eva luate the antibacterial activities of the essential oil and water extract of Uigur herb ZuFaQiNi (Hyssopus officinalis) and the spasmolytic activities of the essential oil of the plant. MethodsThe effects of different parts of Hyssopus officinalis on bacteria were measured by MIC and filter paper diffusion, while the effects of relaxing the contraction of tracheal smooth muscle induced by carbachol and histamine were eva luated respectively. ResultsThe essential oil exhibited greater antibacterial activities than those of water extract with MIC 0.1,0.2 and 0.4 μg/ml to Straphylocous aureus, Escherichia coli and Candida albicans respectively. Volatile fraction also exhibited remarkable activities of relaxing tracheal smooth muscle on tested mice and guinea pigs with IC50 9 and 0.3 μg/ml to carbachol and histamine contractile agents respectively.ConclusionHyssopus officinalis cultivated in China possesses the pharmacological activities in antibacteria and spasmolysis which were in agreement with the practical uses of the plant for cough, asthma and bronchitis in Uigur medicine. Aording to our experiments, essential oil may hold the potential to be further developed as a therapeutic agent against respiratory infections and/or asthmas.
Key words：Hyssopus officinalis; Antibacterial; Spasmolytic
维药“祖发奇尼”为唇形科多年生草本植物神香草(Hyssopus officinalis)，是最早生长于地中海和黑海附近地区的一种多年生芳香植物，高约30～100 cm，花为蓝、红和白色，花、叶可入药〔1，2〕。在欧洲神香草从古时起就有栽培，作为香味蔬菜广受欢迎。在印度作为药用植物亦被人熟知，能制成祛痰剂、发汗剂、健胃剂、驱虫剂、利尿剂等多种内服药剂。在我国新疆维吾尔族自治区北部有野生的分布，且在维吾尔医药中有悠久的使用历史，是一种维吾尔族民间习用草药，被维医广泛用于治疗咳嗽、哮喘、支气管炎、外伤和风湿等症。《维吾尔药志》中记载：药用全草，全株主要含挥发油。具有痉挛停生物碱样作用，使支气管痉挛解除，而具镇咳作用。并有抗麻风和杀原虫作用。可用于咳嗽气喘，感冒发烧。每次用量3～6 g〔3，4〕。近年，在新疆维吾尔族自治区，人工种植神香草获得成功，为开发应用维药提供了充足的物质资源。本实验采用新疆芳香植物种植基地种植的神香草，对其精油和水提物的抗菌和解痉作用进行比较研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器CS5013C型恒温水浴槽，重庆四达实验仪器厂公司；MIT0202/D张力换能器，MI 110 PowerLab放大器，PowerLab/8SP高速放大器，M1740四道生理记录仪，Chart V 3.4.6（PowerLab）记录和分析软件，均购于 AD Instruments 公司。
1.2 药品与试剂神香草于200512采集于新疆维吾尔族自治区芳香植物种植基地，由上海交通大学农业与生物技术学院姚雷教授鉴定为唇形科植物神香草（Hyssopus officinalis）的全草。卡巴胆碱（h），批号111K1729；组胺（His），批号21K1128，均购于Sigma公司。试验用普通琼脂平板、5 ml/L的鲜血琼脂平板、普通营养肉汤均按常规方法配制。神香草精油与水提物的制备：精油制备〔5，6〕：取中等干燥的地上部分，加入8倍量水进行水蒸汽蒸馏，收集馏分。将馏分用乙醚萃取3次，回收乙醚，即得精油，得率 0.06%（v/w）。精油组分由GCMS分离和鉴定：异蒎莰酮 (32%), 3蒎烷酮(18.3%), 1(2乙烯基)丁香酚(5.4%), ()香桃木醛(3.9%)，反松香芹醇(3.5%)，2戊烯, 5烃氧基戊烷(E) (3.1%)，苄叉醇(2.8%)，甲基丁香酚(2.2%), 3-己烯1醇 (1.7%)，蒎二醇 (0.81%), 糠醛 (0.63%)，匙叶桉油烯醇(0.54%)，莰芬(0.63%)，香桃木烯醇(0.40%)，E柠檬醛(0.35%), 水芹醛(0.29%), 顺牛膝草素 (0.26%)及微量其它已知化合物。水提物的制备：经水蒸气蒸馏提取挥发油后的水液，减压浓缩至小体积后，喷雾干燥，得到褐色粉末，使用时溶解于灭菌后的生理盐水中备用。精油与水提物于4～6℃冷藏保存，临用加水配成一定浓度的溶液。
1.3 供试菌种 金黄色葡萄球菌(Straphylocous aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、白色念珠菌(Candida albicans)由上海交通大学农业与生物技术学院微生物实验室提供，配成浊度为105～106/ml的菌液。
1.4 动物 SD雄性大鼠和 Hartley 雄性豚鼠，体重 325～350 g，10～15周龄，动物合格证号：SCXK (h2003－0003)，购于上海市斯莱克实验动物有限责任公司。
2 方法
2.1 最低抑菌浓度法(MIC)测定抗菌作用将上述菌株的斜面培养物，接种于普通肉汤之中，37℃培养箱培养24 h。将培养物稀释1000倍,将制备好的神香草精油溶液及水提物溶液与肉汤在试管内进行混合，分别依次配成0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05和0.01 μg/ml及25，12.5，6.25，2.5，1.25，0.625，0.125 μg/ml的7种不同浓度的试验药液，分别接种 0.1 ml菌液置37℃恒温培养箱中培养24 h，观察生长情况。将无肉眼可见细菌生长的试管中的肉汤取一珀珥环划线于营养琼脂平板，37℃培养箱培养24 h，以平板上菌落生长数≤5个的药物浓度作为最低抑菌浓度(MIC)〔7〕。每种实验菌做三皿，结果见表1～2。