不同溶剂对蜂胶黄酮提取率影响的研究(一)

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作者：张云香， 杨志孝， 安蔚， 王家富

【关键词】 溶剂

　　摘要：目的检测泰山蜂胶提取液中总黄酮含量。方法用不同浓度乙醇做溶剂，采用超声波法提取泰山蜂胶，利用紫外分光光度法对泰山蜂胶提取液中总黄酮含量进行定量分析同时用原子吸收-分光光度法检测了提取液中铅含量。结果不同浓度乙醇的蜂胶提取率和黄酮含量不同，且铅含量均小于1 μg?g-1。结论泰山蜂胶的黄酮含量较高，具有较高的药用价值。

　　关键词：泰山蜂胶；提取液；总黄酮；定量分析

　　蜂胶是蜜蜂采集松树、杨树等植物的芽苞分泌物、树脂等，并混入蜂蜡和其上颚腺分泌物经咀嚼加工而成的一种具有芳香味的胶状物。蜂胶富含多种营养成分和多种具有药用价值的活性成分，这些活性成分中主要是黄酮类化合物。黄酮具有抗菌、抗病毒、抗炎症、抗肿瘤、免疫调节、清除自由基等重要药理价值〔1，2〕。蜂胶易溶于有机溶剂，故常用醇提法提取。本实验室对泰山蜂胶进行提取，并检测了提取液中黄酮及铅的含量。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 原料及来源泰山柏树蜂胶取自泰山之虎山养蜂场；蜂种:意大利蜜蜂，采集时间：秋季。

　　1.1.2 实验器材S-54紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)；M-3100型原子吸收-分光光度计(美国PE公司)；KQ-500E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； KS-500电子天平；FC204电子分析天平(上海恒华科技有限公司)。

　　1.1.3 试剂芦丁(国药集团化学试剂有限公司)；三氯化铝(天津市博迪化工有限公司);硝酸（HNO3）、甲醇（methanol）为分析纯；高氯酸（HCLO4）为优级纯；乙醇(alcohol)浓度95%;水为三蒸水。

　　1.2 方法

　　1.2.1 蜂胶提取方法采集的新鲜粗蜂胶置-20℃过夜后粉碎，分别用三蒸水、浓度为24%，30%，70%的乙醇与蜂胶按固液比1∶4的比例浸泡1 h,于超声波清洗器中超声20 min，静置2 h，再超声20 min，静置2 h后，过滤至上清液澄清，倒入棕色瓶中低温保存备用。四种浓度乙醇提取液以下依次简称为water，24%al，30%al，70%al。每组分别重复提取3次，分别测定结果取其均值。

　　1.2.2 蜂胶提取率测定四种提取液各取10 ml，分别加入四个已经准确称重的干燥空烧杯中，在恒温电热套中加热，待干燥后称重，减去空烧杯的重量，即为提取液中蜂胶得率。见表1。表1 四种不同浓度乙醇蜂胶提取率（略）

　　1.2.3 四种蜂胶提取液中总黄酮含量测定按芦丁标准品法〔3〕。仪器使用S-54紫外分光光度计。测定波长420 nm。

　　标准曲线的绘制：精确称取芦丁50 mg加15 ml甲醇溶解，转移至50 ml的容量瓶中定容，该标准贮备液浓度为1 mg／m1AlCl3显色分别配制浓度为0.0，10.0，20.0，30.0，40.0，50.0 μg/ml系列溶液，从图1可看出在芦丁的最大吸收波长420 nm处测定吸光度最稳定。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,计算机自动绘制工作曲线见图2，并确定浓度方程为：C=38.739A+0.329，相关系数r＝0.996 7。

　　样品测定：分别移取蜂胶提取液各200 μl，70%乙醇提取液取10 μl，各加0.5 ml 2.5%的AlCl3和0.8 ml 1% KCl，用乙醇定容至5.00 ml，摇匀后静止30 min后进行测定，直接读取浓度并根据下列公式求算出原液的含量。见表2。表2 四种不同浓度乙醇蜂胶提取液中总黄酮含量（略）

　　1.2.4 蜂胶提取液中重金属铅含量测定将四种提取液分别在恒温电热套中加热，待干燥后称取200 mg加入混合酸10 ml（HNO3与HClO4 3∶1混和），低温消化至澄清无色液体，水浴加热驱酸，近干，加少量亚沸纯蒸水定容上机检测。结果见表3。表3 四种不同浓度乙醇蜂胶提取液中铅含量（略）

　　2 结果

　　表1结果显示，70%乙醇提取蜂胶得率最高，且有随乙醇浓度降低提取率减少的趋势。从表2可见,70%乙醇蜂胶提取液中黄酮含量明显高于其他组,且四组提取液中黄酮含量与蜂胶得率成正比。