沙枣多糖对小鼠免疫功能影响的研究(一)

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作者：廉宜君，李炳奇，肖芙蓉，吕新建

【摘要】 　　目的研究沙枣多糖(EAPS)对正常小鼠免疫功能的影响。方法将沙枣多糖分为3个剂量组(60，120，240 mg・kg-1)，连续给小鼠ig 7 d，进行免疫脏器指数的检测、碳粒廓清试验、血清溶血素形成和绵羊红细胞诱导的迟发型超敏反应，探讨沙枣多糖对正常小鼠免疫功能的影响。结果沙枣多糖能显著提高小鼠免疫脏器指数，单核巨噬细胞系统的吞噬功能，增强小鼠迟发型超敏反应，促进溶血素的生成。结论沙枣多糖能提高机体的非特异性和特异性细胞免疫功能。

【关键词】 沙枣 多糖 免疫功能

　　沙枣Elaeagnus angusti folia L.又名香柳、桂香柳、银柳、七里香等，属胡秃子科落叶小乔木或灌木，在西北各省的干旱沙区广为栽培。据《新疆中草药手册》记载，沙枣能“强壮，镇静，固精，健胃，止泻，调经，利尿”。维吾尔医多将其用于脾胃虚弱，消化不良，肠炎腹泻等疾病的治疗〔1，2〕。目前沙枣主要是以食用为主，其深加工还没有得到充分的开发利用。为了提高沙枣产品的附加值，石河子大学投入大量精力对沙枣进行了研究，发现沙枣中含有丰富的沙枣多糖，对动物具有良好的免疫保健功能。为了开发这一药用资源，我们将沙枣多糖作用于小鼠，通过测定以观察对小鼠免疫器官脾、胸腺指数、单核巨噬细胞吞噬功能、血清半数溶血值（HC50）、迟发型超敏反应功能的影响，为中药有效成分的进一步研究提供理论基础。

　　1 材料与仪器

　　1.1 动物昆明种小鼠，8～12周龄，体重18～25 g，雌雄随机，石河子大学实验动物中心提供。

　　1.2 试剂丙酮，乌鲁木齐化学试剂厂产品；石油醚，乌鲁木齐化学试剂厂产品；印度墨汁，北京笃信精细制剂厂产品；绵羊红细胞悬液（SRBC），石河子大学实验动物中心提供；Alsever＇s血球保存液，按常规配制；都氏试剂（NaHCO3 1.0 ｇ，K 0.05 ｇ），高铁氰化钾0.2 ｇ，加水至1 000 ml，4℃保存；补体（豚鼠血清）。

　　1.3 仪器KQ-250型超声波提取仪，昆山市超声仪器有限公司产品；SENCOR502B旋转蒸发器，上海申生科技有限公司产品；SartoriusBS210S电子天平，北京塞多利斯天平有限公司产品；SHZ-C型循环水式多用真空泵，巩义市英欲予华仪器厂产品；722型光栅分光光度计，上海精密科学仪器厂产品；镀铬游标卡尺，湖北省教学仪器厂，精密度0.02 mm。

　　2 方法

　　2.1 沙枣多糖的提取称取沙枣粉末200.0 g，加少量水浸泡24 h湿润。加入石油醚（沸程30～60℃）2.0 L，在超声循环提取仪中提取30 min，过滤。在滤渣中加入95%的乙醇2.0 L，超声提取30 min，过滤。在所得滤渣中加入蒸馏水2.0 L，超声提取30 min，重复用水提取3次。提取完毕后过滤、合并滤液，在旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至200 ml。加入95%的乙醇使溶液中乙醇含量达到80%，低温静置过夜，抽滤，滤渣分别用乙醚、丙酮、无水乙醇洗涤数次，得灰白色粉末样物质，放入烘箱中于60℃干燥备用。由苯酚-硫酸法测得提取物中沙枣多糖含量为50.28％。

　　2.2 检测项目及方法

　　2.2.1 实验动物分组及给药方式本实验设计了高、中、低3个剂量组(每组10只)，即小鼠每日每只经口给予(加入饮水法)沙枣多糖60 mg・kg-1体重（低剂量)，120 mg・kg-1体重（中剂量)和240 mg・kg-1体重（高剂量)，分别相当于人体推荐用量的5，10，20倍。对照组给予正常饲料和饮水。

　　连续给予受试物7 d后活杀小鼠并测定各项免疫指标。

　　2.2.2 小鼠免疫器官重量的测定〔3〕称小鼠体重，颈椎脱臼处死小鼠，脾脏、胸腺称其湿重，计算脾指数和胸腺指数。

　　脾指数=脾重量（mg）/体重（g）

　　胸腺指数= 胸腺重量（mg）/体重（g）

　　2.2.3 单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的测定〔4〕 末次给药后1 h，称体重，各鼠均按0.1 ml/10 g剂量由尾静脉注入印度墨汁（以生理盐水按1:5稀释），注射后分别在1 min(t1)、5min(t2)从小鼠眼眶静脉丛取血20 μl，溶于2.0 ml 0.1% Na2CO3溶液中摇匀，放置20 min后于680 nm处测其吸光度值（A），以0.1% Na2CO3溶液做空白对照，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值和校正廓清指数α值。计算公式：K＝（logA1－logA2）／(t2－t1)；α＝K1/3×体重/（肝重＋脾重）

　　2.2.4 小鼠血清溶血素的检测〔5〕 给药第3天，每鼠腹腔注射2％SRBC 0.2 ml致敏，并继续给药。致敏后第4于末次给药后90 min取小鼠眼球血，静置1 h，2 000 r/min离心10 min，取上层血清20μl，用NS稀释500倍，取此血清样1 ml作为补体，37℃温浴1 h，反应结束，将反应管立即移入冰浴中，以终止反应，以2 000 r/min离心10 min，取1 ml上清液盛于由3 ml都氏试剂的试管摇匀，放置10 min后于540 nm测其吸光度值（A）。计算小鼠的半数溶血值（HC50）。

　　样品HC50=(样品的吸光度值/SRBC半数溶血时的吸光度值)×稀释倍数

　　2.2.5 迟发型超敏反应（DTH）检测 按文献方法〔6〕 给药第3天 ，每鼠腹腔注射2％SRBC 0.2 ml致敏，并继续给药。致敏后第4日取20％SRBC50 μl悬液注射在小鼠右侧足垫皮下，左侧注射50 μl生理盐水，24 h后用游标卡尺（精密度0.02 mm）测定小鼠左右足垫厚度之差为肿胀程度。同一部位测量3次，取平均值。

　　3 结果

　　3.1 对小鼠免疫器官的影响结果（见表1）显示EAPS各剂量组均能增加小鼠胸腺和脾脏的重量。与对照组胸腺指数比较，EAPS在120 mg・kg-1和 240 mg・kg-1剂量组有显著性差异(P0.05) ；而60 mg・kg-1剂量组无显著性差异(P>0.05)；与对照组脾脏指数比较，EAPS在120 mg・kg-1剂量组，呈极显著性差异(P0.01)；60 mg・kg-1和 240 mg・kg-1剂量组，均有显著性差异(P0.05)。

　　表1 沙枣多糖对小鼠免疫器官的影响（略）

　　与对照组比较,* P0.05，**P0.01；n=10

　　3.2 对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的影响由表2数据可知，EAPS各剂量组均能明显提高廓清指数和吞噬指数。与对照组比较，EAPS的120，240 mg・kg-1剂量组廓清指数均达到极显著水平(P0.01)，EAPS的60 mg・kg-1剂量组的廓清指数也达到了显著水平(P0.05)。EAPS各剂量组对小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能的增强作用，以120 mg・kg-1剂量组最为显著。