原花青素对CIA大鼠足爪组织中NF?κB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响(一)

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作者：林观平，刘国玲，丁伟斌，梁统，周克元

【摘要】 目的 研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）大鼠足爪组织中核转录因子NF?κB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL?1β、TNF?α等水平的影响。方法 建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型，免疫组化法检测足爪组织中NF?κB/p65蛋白的表达，ELISA法检测CIA大鼠血清中IL?1β和TNF?α的含量。结果 原花青素能剂量依赖性地下调NF?κB/p65蛋白的表达，降低CIA大鼠血清中TNF?α和IL?1β的水平。结论 原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF?κB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF?α、IL?1β的水平有关。

【关键词】 原花青素；Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎；NF?κB/p65；TNF?α；IL?1β

　　Abstract:Objective To investigate the inhibitory effect of proanthocyanidins on the expression of NF?κB/p65 protein in the tissue of Type Ⅱ collagen?induced arthritis (CIA) rat＇s paws, and the effects of proanthocyanidins on the contents of TNF?α、IL?1β in CIA rat＇s serums.Methods CIA model in SD rats was established. The proteins expression of NF?κB/p65 and MMP?9 in the skin of the rats paws was analyzed with immunohistochemistry. The contents of TNF?αand IL?1β in CIA rats serum were measured with ELISA.Results Proanthocyanidins can down?regulate the expression of NF?κB/ p65 protein and decrease level of TNF?αand IL?1β in CIA rats serums.Conclusion The anti?inflammatory mechanisms of proanthocyanidins may be related to decreasing the protein expression of NF ?κB/p65 and suppressing proinflammatory factors, i.e., TNF?α and IL?1β in CIA rats.

　　Key words:proanthocyanidins； type Ⅱcollagen?induced arthritis (CIA)； NF?κB/p65 ；TNF?α； IL?1β

　　类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种自身免疫性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现〔1〕。其发病机理尚不完全明确，传统治疗RA的药物虽能起到抑制RA的作用，但副作用大，因此寻找安全有效的治疗RA的药物是目前RA研究的重点。原花青素是一大类多酚类化合物的总称，由不同数量的儿茶素或表儿茶素组成，具有抗过敏、抗肿瘤、改善心血管、抗炎等多方面的作用〔2〕。为进一步探讨原花青素的抗炎作用机制，本实验以CIA大鼠为炎症模型，研究原花青素对CIA大鼠NF?κB/p65蛋白表达及血清中促炎性细胞因子TNF?α、IL?1β含量的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　原花青素(proanthocyanidins)（南京学子医化研发中心，纯度95%），弗氏完全佐剂、Ⅱ型胶原、多聚赖氨酸（Sigma公司），地塞米松(Dexamethasone)盐酸注射液（5 mg/mL，河南确山龙渊药业有限公司），氯化钠注射液（石家庄四药股份有限公司），冰醋酸（分析纯，广州化学试剂二厂），TNF?αELISA试剂盒、IL?1β ELISA试剂盒、80?2型离心机（上海手术器械厂），450型酶标免疫测定仪（美国Bio?Rad公司），Leica RM 2135型石蜡切片机（德国Leica公司），Galanz微波炉（广东格兰仕企业集团公司），NF?κB/p65羊IgG单克隆抗体免疫组化S?P试剂盒（北京中山公司）。超清级SD大鼠，雌雄各半，体质量180 g左右，由广东医学院动物中心提供，合格证号：2006A027。

　　1.2 方法

　　1.2.1 Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）模型的制作 实验用大鼠60只，雌雄各半，按统计学方法随机分为6组:A 正常组对照组，B 模型对照组，C地塞米松组（2 mg/kg），D原花青素大剂量组(30 mg/kg)，E 原花青素中剂量组(6 mg/kg)，F 原花青素小剂量组(1.2 mg/kg)，每组10只。将Ⅱ型胶原15 mg溶于7.5 mL 预先配制好的0.1 mol/L 的醋酸中，质量浓度为2 mg/mL,共7.5 mL，4 ℃过夜，充分溶解。次日，与弗氏完全佐剂等体积于冰浴中混合，使之充分乳化，制成稳定的乳化剂15 mL,每毫升含1.0 gⅡ型胶原,置4 ℃冰箱保存备用。SD大鼠，除正常对照组外，以0.1 mL /只的剂量在鼠的左后肢足跖皮内注射。操作时，先将注射部位以75%(ρ)酒精棉球消毒，然后用1 mL注射器注射乳化剂，见皮肤鼓起一小丘后拔针，诱导大鼠发生类风湿性关节炎(CIA)。正常对照组在同一部位同法注射0.1 mL生理盐水。实验在广东医学院动物中心实验室进行。于造模后第7天腹腔注射（原花青素）给药，每天1次，一直给药至第27天。按照大鼠体质量给药1.0 mL/100 g，正常对照组和模型组注射生理盐水。