正交实验优选补阳还五合剂的提取工艺(一)

详细内容

【摘要】 　　目的建立补阳还五合剂的提取工艺。方法采用正交实验的方法，以黄芪甲苷苯甲酰化后产物含量、水提得率和正丁醇萃取部位得率为指标，综合考察每次加水量、总煎煮时间、煎煮次数对提取效果的影响。结果加水8倍/次，共煮2 h， 2次提取为最佳提取工艺，验证实验证明了其优于正交各方法。结论 该优选出的提取工艺合理。

【关键词】 补阳还五合剂 正交实验 黄芪甲苷

　　Abstract：ObjectiveTo establish an optimal extraction process for the mixture of Buyang Huanwu. MethodsThe content of Astragalus RP, extractive rate of water and extractive rate of n-butyl alcohol were used as indexes, and orthogonal design was performed to optimize the extraction process. ResultsThe best extraction process was A2B2C2(A：adding water volume; B：decocting time C：decocting frequency), and it is the best method by validating. ConclusionThe method is reasonable.

　　Key words： Buyang Huanwu mixture ; Orthogonal design; Astragalus RP

　　补阳还五合剂由黄芪、当归等中药组成，是经典名方制剂，具有补气、活血、通络的功能。本工艺采用L9（34）正交表安排实验，以黄芪甲苷衍生化产物的含量、水提取得率和正丁醇萃取部位得率为指标，综合考察了每次加水量、总煎煮时间、提取次数3个因素对提取效果的影响，优选出该合剂的提取工艺。

　　1 仪器与试剂

　　高效液相色谱仪，agilent1100，四元泵（G1311A），柱温箱（G1316A），VWD检测器（G1314A），工作站（Chemsstation），agilent手动进样器（10 μl定量环）。101-1型电热鼓风干燥箱(南通扈通制药器械设备厂)；标准品，黄芪甲苷（Astragalus RP 0781-9706）中国药品生物制品检定所提供。所用药材均购于江苏省药材公司，并由江苏省中医院制剂实验室专家鉴定。 吡啶、正丁醇、氢氧化钠、四氢呋喃、苯甲酰氯、三乙胺均购于南京化学试剂一厂，均为分析纯，甲醇为色谱纯。

　　标准品贮备液：精密称取黄芪甲苷标准品7.04 mg，加吡啶溶解定容于10 ml容量瓶中，标准品溶液浓度为0.704 mg/ml，备用。

　　2 方法与结果

　　2.1 相关条件

　　2.1.1 色谱条件固定相：supelcoODS C18(4.6 mm×25 cm，5 μl) 色谱柱；流动相：甲醇-水-四氢呋喃（90∶6∶4，V/V/V，0.2%三乙胺）；柱温25℃，流速1.2 ml/min，检测波长230 nm。灵敏度0.1 AUFS。

　　2.1.2 衍生化反应条件

　　称取黄芪甲苷适量，置容量瓶中，吡啶溶解定容后精密吸取1 ml置容量瓶中，加入2 ml氯仿，吡啶-氯仿（1∶2，V /V），在冰水浴的条件下加入苯甲酰氯0.4 ml。摇匀后置4℃冰箱中保存24 h，使反应完全。取出置蒸发皿中，在一定条件下挥干有机溶剂，置空气中一段时间后能凝结，甲醇溶解定容于容量瓶中。

　　2.2 正交实验正交实验的设计方案

　　选用正交实验表L9（34），因素设计见表1。3因素分别为：加水倍数、总提取时间、提取次数。3因素3水平共做9组实验。表1 因素水平（略）

　　2.3 水提取得率精密吸取各样品溶液适量，相当于1 g药材量，水浴浓缩至浸膏。取出，置105℃烘箱中5 h，取出，放冷称量，半小时后再置烘箱中1 h，取出，放冷，称量。

　　2.4 正丁醇萃取部位得率

　　取相当与1 g药材的各样品水提液与分液漏斗中加10 ml水饱和的正丁醇萃取，共4次，正丁醇层合并。正丁醇层水浴蒸干，然后置105℃烘箱5 h后取出，放冷，称量，30 min后再置烘箱中1 h，取出，放冷，称量。

　　2.5 标准曲线制备

　　精密吸取对照品贮备液1 ml于10ml容量瓶中，处理参照“衍生化反应条件”项下进行衍生化。衍生化产物用甲醇洗涤并转移、定容于10 ml容量瓶中，再依次精密吸取5ml定容于10 ml容量瓶，对照品衍生化产物溶液浓度为：0.070 4，0.035 2，0.017 6，0.008 8，0.004 4，0.002 2，0.001 1 mg/ml，上述色谱条件进行HPLC测定。以黄芪甲苷衍生物峰面积对黄芪甲苷浓度（mg/ml）直线回归，结果表明，黄芪甲苷在0.001 1～0.070 4 mg/ml范围内线性关系良好，回归方程为Y=75 117X，r=0.999 95。

　　2.6 样品处理同取各样品20 ml于分液漏斗中，加水饱和的正丁醇萃取，萃取3次，20 ml/次，正丁醇层合并加1%NaOH洗涤，洗涤3次12 ml/次，再加正丁醇饱和水洗涤，洗涤2次，6 ml/次。正丁醇层水浴蒸干，吡啶溶解定容于5 ml容量瓶中，精密吸取1 ml置容量瓶中，加入2 ml氯仿，在冰浴的条件下加入苯甲酰氯0.4 ml。摇匀后置4℃冰箱中保存24 h消失，使反应完全。取出置蒸发皿中挥干有机溶剂，甲醇定容于容量瓶中，即为样品溶液。