反相高效液相色谱法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量(一)

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作者：邓放， 刘圆， 刘超， 孟庆艳， 高泽文

【关键词】 盐酸小檗碱；,,复方小檗片；,,含量测定；,,反相高效液相色谱法

　　摘要：目的采用反相高效液相色谱(RPHPLC)法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。方法用Kromasil色谱柱（5μm，250 mm×4.6 mm），流动相∶乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500 ml∶500 ml∶3.0 g∶1.5 g），流速：1 ml?min-1，柱温：40℃，检测波长为345 nm。结果在0.021 2～0.233 2 μg之间，峰面积与进样量的线性关系为Y=3 513 092.99 X-15 938.76（r=0.999 9），平均回收率为97.22％。测得3批片剂中盐酸小檗碱的含量分别为0.772，0.748，0.749 mg/片。结论 所建方法简便、准确、重复性好，可用于复方小檗片中盐酸小檗碱的含量测定。

　　关键词：盐酸小檗碱； 复方小檗片； 含量测定； 反相高效液相色谱法

　　Determination of Berberine Contained in Prescription of Berberine Pill by RPHPLC

　　Abstract：ObjectiveTo establish an RPHPLC method to determine berberine from prescription of berberine.MethodsThe column were Kromasil (5μm，250 mm×4.6 mm),the mobile phase consisted of methyl cyanide:water∶KDP∶SDS(500 ml∶500 ml∶3.0 mg∶1.5 mg),the flow rate was 1 ml/min and the UV detector was set at 345 nm.ResultsThe method displayed good linearity within the concentration ranges of 0.021 2～0.233 2μg(r=0.999 9). The average recovery was 97.22%. The contents of three lots of prescription of berberine were 0.772, 0.748，0.749 mg/ pill.ConclusionThis method is simple,aurate,replicate and suitable for the determination of berberine in prescription of berberine.

　　Key words：Berberine; Prescription of berberine pill； Determination; RPHPLC

　　复方小檗片，由龙胆花、小檗皮、甘草等多味药材组成,含有龙胆碱、龙胆苦苷、三萜皂苷类成分、生物碱及莨菪类成分等〔1〕。具清热化痰，止咳平喘的功效，小檗碱是主要成分之一〔2~4〕。本实验利用HPLC法测定复方小檗片中盐酸小檗碱的含量。

　　1 仪器与试药

　　仪器：Waters2695Waters2996与SPD6AV紫外检测仪；试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。对照品：盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（07139906含量测定用）。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品及供试品溶液制备

　　2.1.1 对照品溶液 精密称取盐酸小檗碱对照品2.12 mg，置100 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,即得（每毫升含盐酸小檗碱0.021 2 mg）。

　　2.1.2 供试品溶液 〔5〕取复方小檗片10片，除去薄膜衣，研细，取0.72 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置30 min，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.2 色谱条件色谱柱：C18 250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：乙腈水磷酸二氢钾十二烷基磺酸钠（500 ml∶500 ml∶3.0 g∶1.5 g）；流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；检测波长：345 nm。

　　2.3 线性范围的考察精密量取上述盐酸小檗碱对照品溶液1，3，5，7，9，11 μl注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)，测定其峰面积，结果见表1，并以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，进行回归，得回归方程。

　　表1 盐酸小檗碱线性关系考察结果（略）

　　在所拟定的色谱条件下，盐酸小檗碱在0.021 2～0.233 2μg之间，进样量与峰面积线性关系良好。

　　2.4 空白实验取不含小檗皮的阴性片粉适量，按供试品溶液制备方法制备空白对照溶液，进样10 μl，记录色谱图(见图1)，可见其它成分对盐酸小檗碱的测定无干扰。

　　图1 盐酸小檗碱对照品（a）、样品（b）和空白溶液（c）的HPLC图谱（略）

　　2.5 精密度实验精密吸取盐酸小檗碱(0.021 2 mg/ml)对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积值结果见表2。

　　表2 精密度实验结果（略）

　　盐酸小檗碱的RSD为0.202％，以上结果表明，精密度良好。