瓜蒌皮中水溶性多糖的提取及含量测定(一)
详细内容
【摘要】 目的从瓜蒌皮中提取多糖，并测定其含量。方法水提醇沉法提取瓜蒌多糖。以葡萄糖为对照品，硫酸-苯酚法进行含量测定。结果标准曲线回归方程为A=6.807 1 C+0.022 7，r=0.999 1，瓜蒌皮中多糖含量为5.43%，平均回收率99.11%。结论瓜蒌皮中多糖含量较高，该方法简便可靠，精密度好。
【关键词】 瓜蒌皮； 多糖； 提取； 含量测定
Abstract：ObjectiveTo extract and determine the content of polysaharides in Pericarpium trichosanthis.MethodsPolysaharides of Pericarpium Trichosanthis were obtained by hot water extraction and alcohol sedimentation. Phenol-vitriolic colorimetry was used to determine the content.ResultsThe standard curve was A=6.807 1C+0.022 7,r=0.9991.The polysaharide content in Pericarpium trichosanthis was 5.43%, recovery rate was 99.11%.ConclusionThe polysaharides content is high in Pericarpium Trichosanthis,and the method is precise,easy and reliable.
Key words：Pericarpium trichosanthis; Polysaharide; Extraction; Content determination
瓜蒌是我国传统中医用药之一。据《本草纲目》记载，其有润肺、化痰、散结、滑肠作用。现代医学研究表明，瓜蒌提取物有扩张冠状动脉、增加血流量、提高耐缺氧能力、降低血清胆固醇、抗菌、抗癌等多种作用〔1〕。关于瓜蒌所含挥发油、氨基酸、微量元素、甾醇类和三萜类、油脂等成分的研究已有一些报道，而瓜蒌的多糖成分一直少有研究。本实验对瓜蒌皮中水溶性多糖的提取纯化方法进行了研究，并用硫酸-苯酚法测定了多糖的含量。
1 仪器与试药
紫外分光光度计（岛津UV-2401，日本岛津公司），离心机（LD-2A型，北京医用离心机厂），旋转蒸发仪（ZFQ-85A，上海医疗器械厂），真空干燥箱（DZF-1B，上海跃进医疗器械厂）。瓜蒌皮购于浙江平湖药材公司，试剂均为国产分析纯。
6%苯酚溶液的制备：取苯酚100 g，加0.1 g铝和0.05 g NaHCO3，在180～182℃蒸馏，空气冷凝，得白色针状结晶。取重蒸馏后的苯酚15 g，精密称定，置250 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，避光冷藏。
2 方法与结果
2.1 瓜蒌多糖的提取与精制瓜蒌皮粉碎，过20目筛，取200 g，用95%乙醇浸泡2 d脱脂，药渣加水3 000 ml，煮沸4 h，放置，8层沙布压滤，残渣重复煮沸提取4 h，过滤，合并滤液，离心分离，取上清液，60℃减压浓缩至原来体积的1/4，浓缩液加4倍量的乙醇，冰箱放置24 h，吸出多糖粗品。用Sevag法，氯仿∶正丁醇（4∶1）脱蛋白，以3 000 r/min离心20 min，除去蛋白质胶状沉淀，重复操作4 次，直至紫外测定在260，280 nm无蛋白质和核酸的吸收峰。上清液对蒸馏水透析48 h，除去氯仿和正丁醇。浓缩透析液至100 ml，加95%乙醇320 ml醇析多糖，静置24 h，过滤，沉淀物60℃减压干燥，得浅黄色瓜蒌多糖(1.859 5 g)。
2.2 标准曲线的绘制
2.2.1 葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品50 mg，置500 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2.2 标准曲线的制备〔2〕精密吸取上述葡萄糖标准溶液1，2，3，4，5，6，7， 8 ml，分别置10 ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1ml，加6%苯酚水溶液1.0 ml，浓硫酸6 ml，静止10 min，旋涡混合5 min，室温放置20 min，于波长490 nm处测定吸收度，以1 ml蒸馏水按同样显色操作为空白，以多糖毫克数为横坐标，吸收度值为纵坐标，求得标准曲线的回归方程为：A=6.807 1C+0.022 7,r=0.999 1。见图1。
图1 多糖含量测定标准曲线（略）
2.3 换算因子的测定精密称取60℃干燥至恒重的瓜蒌多糖13.7 mg，置100 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 ml，按测定标准曲线同样的方法测得吸收度A为0.487，从回归方程中求出多糖供试品中葡萄糖含量为0.068 2 mg，按下式计算换算因子f，测得f=2.01 f=W/(C×D)