岩黄连生物总碱对肝纤维化大鼠 TGF-β1及MMP-9的影响(一)

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作者：梁永红 贾杰 Peter S. Spencer 毛宇昂 覃崇举

【摘要】 目的观察岩黄连生物总碱对肝纤维化大鼠TGF-β1及MMP-9表达的影响，并探讨其抗纤维化的可能机制。方法Wistar大鼠80只随机分为6组，除正常组外其他各组首次皮下注射50% l4 5 ml・kg-1，以后每3天注射1次30% l4 3 ml・kg-1。正常组给予等体积花生油，持续12周，给药自造模之日开始。结果l4所致慢性肝纤维化大鼠有明显的肝损伤及慢性肝纤维化的表现。与模型组相比，岩黄连生物总碱三个剂量组能不同程度改善肝功能指标；肝组织中Hyp含量较模型组明显降低；病理组织学检查表明其肝脏病变程度较模型组明显减轻；肝组织中TGF-β1，MMP-9的表达较模型组明显下降。结论岩黄连生物总碱对慢性肝纤维化大鼠具有肝保护作用及抗肝纤维化作用,可能通过抑制TGF-β1和MMP-9表达而促进肝纤维化的逆转。

【关键词】 岩黄连生物总碱 四氯化碳 肝纤维化

肝纤维化是各种慢性肝脏疾病向肝硬化发展的必经阶段。阻断肝纤维化的发生和发展，对防治肝硬化和慢性肝病具有重要意义。我国是病毒性肝炎的高发区，目前肝纤维化的发病率呈上升趋势，严重危害人们健康。将肝脏病变终止于纤维化阶段或逆转之，是当前医学界关注的热点之一。岩黄连是一种纯中药制剂，实验研究已表明其对甲、乙、丙型肝炎病毒均有不同程度的抑制和杀灭作用。本实验旨在观察岩黄连生物总碱对l4所致大鼠慢性肝纤维化的肝保护作用及抗纤维化作用，并初步探讨其作用机制。

1 材料

1.1 动物 Wistar大鼠，清洁级，体重180～220g，雌雄各半，购于广西医科大学实验动物中心。

1.2 药品与试剂 岩黄连生物总碱为广西药材岩黄连醇提取生物总碱，本实验室提供。四氯化碳，重庆川江化学试剂厂；联苯双酯，北京协和药厂；ALT，AST，TP，ALB，MDA，SOD，Hyp试剂盒，南京建成生物工程研究所；TGF-β1，MMP-9免疫组化染色试剂盒，北京中杉生物工程有限公司。

2 方法

2.1 动物分组及处理 Wistar大鼠80只，称重后随机分为6组，正常对照组10只，模型组、联苯双酯组（150 mg・kg-1）、CSA高剂量组（100 mg・kg-1）、CSA中剂量组(75 mg・kg-1) 、CSA低剂量组(50 mg・kg-1)各14只。首次按5 ml・kg-1给与大鼠大腿内侧及背部皮下注射50%l4，以后按30% l4 3 ml・kg-1，每周2次，连续12周，制备肝纤维化模型〔1，2〕。空白组用等体积花生油。造模同时CSA各剂量组及联苯双酯组每日灌胃给药，空白组和模型组则每日给与等体积生理盐水灌胃。

2.2 生化指标观察 各组于末次给药后24 h，拔眼球取血，分离血清，按试剂盒说明 进行ALT，AST，TP，ALB等各项指标的测定，取出部分肝组织加冷生理盐水制成10%肝组织匀浆，按试剂盒说明进行MDA，SOD，Hyp指标的测定。

2.3 肝组织病理学观察 末次给药24 h后处死大鼠，取肝大叶相同部位的一小块肝组织固定于10%甲醛溶液，常规脱水，石蜡包埋，制作组织切片，HE染色，普通光镜下观察。

2.4 免疫组织化学观查 取出肝组织用10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，切片机切片，按照试剂盒说明进行免疫组化染色，普通光镜观察。免疫组化染色以汇管区、中央静脉及细胞浆膜或间质有棕黄色颗粒或线状条索状沉积为阳性。免疫组化图像分析：每张切片随机选5个视野，利用病理图像分析软件(RGB)计算其灰度值，取其平均值，并加以统计学分析。

2.5 统计学分析 数据以±s表示，采用SPSS12.0进行统计学分析，组间比较采用t检验，P0.05说明差异具有显著性。

3 结果

3.1 一般状况 纤维化模型组大鼠毛色暗淡、精神萎靡，进食进水减少，易受惊，体重增长缓慢。处死后取肝组织可见模型组肝脏表面粗糙有结节，颜色灰暗，用手触摸感觉发硬，治疗组大鼠毛色较好，食欲尚可，肝组织损害较模型组轻，肝脏质地软，表面较光滑。