冠心病患者血浆MBL含量测定及分析(一)
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作者：程健君 罗强 孙黎 刘华 田嘉明 贾天军 张庶民
【摘要】 目的:测定冠心病患者与健康对照者血浆中MBL含量，分析其变化情况，从固有免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制。方法：采集100例冠心病（CHD）患者空腹静脉血，健康对照者60例，采用ELISA法对血浆中MBL含量进行检测。结果：100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L，标准差为3209；60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L，标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组，经ｔ检验，t=4071，P＜001，差别有统计学意义。结论：冠心病组血浆MBL水平高于健康对照组，二者均值比较差别有统计学意义，血浆MBL参与了冠心病的发生、发展过程。
【关键词】 冠心病；MBL；ELISA；含量
【ABSTRACT】 Objective：The main purpose of this study is to measure the MBL level in plasma with coronary heart disease and try to analyze the possible mechanism of CHDs development from the view of innate immune.Methods:100 blood samples of CHD patients and 60 that of health controls were collected and tested by ELISA.Results:The plasma level of MBL were 3900μg/L, SD 3209 in cases, while 2056μg/L，SD 1824 in controls. The plasma level of MBL in cases is higher than that of controls (t=4071, P＜001).Conclusion:The plasma level of MBL is higher in CHD patients than that in controls.
【KEY WORDS】 CHD; MBL;ELISA;Plasma level
冠心病(coronary heart disease,CHD)是一种严重危害人类健康的疾病,其发病率和死亡率居首位,尤其在发达国家更为严重,而在我国也呈逐年上升趋势〔1〕。其病因和发病机制尚未完全阐明，近年来，冠心病发病的炎症学说越来越得到重视〔2〕，对一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越来越深入。甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin,MBL)是一种兼有调理素和直接激活补体功能的免疫分子，参与构成抗感染的第一道防线[3]。国外有些学者报道MBL与动脉粥样硬化发生、发展有关〔4~7〕，但国内尚无报道，因此本研究主要测定冠心病患者血浆中MBL含量，并对其变化进行分析，从天然免疫的角度探讨冠心病的可能致病机制，为其辅助诊断和治疗提供资料。
1 材料与方法
11 实验材料
主要设备：低温冰柜（thermo，美国）；酶标仪（Star fax 2100，美国）；普通高速离心机（TGL168，上海）
主要试剂：MBL ELISA试剂盒（北京现代高达生物技术有限责任公司）
12 实验方法
121 标本的收集：空腹静脉血标本用EDTAK2抗凝管（2ml）收集。
冠心病（CHD）组:共100例，为河北北方学院附属第一医院20049~200510月住院的冠心病患者，男51例，女49例；年龄45~70岁，平均（6041±9443）岁。病例均经心电图、心肌酶谱和临床症状等综合诊断，符合WHO冠心病诊断标准。
健康对照组：60例，为来院进行健康体检者，男性32例，女28例，年龄43~71岁，平均（6027±7198）岁，病例无冠心病症状、体征，超声心动图及心电图均正常。冠心病组与健康对照组组间年龄无统计学差异。
122 标本的处理
取1ml全血放入15ml离心管中，5000转/min离心5min，分离血浆，-86℃保存，供测定血浆MBL含量。
123 血浆中MBL含量测定
按MBL ELISA试剂盒说明书，基本操作如下：
标本及试剂准备：冠心病、健康对照血浆标本从低温冰柜（-86℃）中取出，溶解并恢复至室温，离心（3500转/min 5min）。取上清2μl，用标本稀释液对标本进行200倍稀释（加入398μl标本稀释液[PBS+005%BSA]），混匀。所有实验用试剂均在室温平衡后使用。
操作步骤：
①取100μl稀释标本加入酶标板中，同时做对照，第一孔加100μl稀释液作空白，第二孔向后依次加含MBL不同浓度（0，1，2，5，10，25，50，100ng/ml）的标准液各100μl，标准孔均作复空；
②置37℃水浴1h；
③将板中的液体弃去，每孔加入150μl洗板液进行清洗，室温静置3min，弃去洗板液，反复3遍；
④清洗后，每孔加入100μl酶标记的MBL抗体，37℃ 1h，使酶标抗体与标本充分结合。
⑤清洗，操作同③ ；
⑥清洗后，每孔加入底物A、B各50μl，室温避光15min。每孔加入终止液50μl，轻轻混匀20s；
⑦用酶标仪比色 测定波长为450nm，参考波长为620nm。在20min内完成。