石榴的质量标准研究(一)
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作者：杨来秀，温爱平，王玉华，吕帅
【摘要】 目的建立石榴的质量控制标准。方法采用薄层色谱法对石榴有效成分没食子酸进行定性分析；采用高效液相色谱法测定石榴中没食子酸含量。结果石榴供试品与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；没食子酸的浓度在4.62～23.10 μg・ml-1范围内呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率98.19 %（RSD=1.68%）。结论该方法灵敏，准确可靠,重复性好，可作为石榴质量控制的方法。
【关键词】 石榴；没食子酸；薄层色谱法；高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo establish the qualitative control methods for Pomegranate.MethodsThe thin layer chromatographic method was used for identification of gallic acid in pomegranate , and the high performance liquid chromatographic method was used for assay. Results Pomegranate for sample and reference substance showed the same color dot in corresponding chromatograph position .The standard curve showed a good linear relationship within the range of 4.62～23.10μg・ml-1. The average recovery was 98.19% with the RSD of 1.68%. ConclusionThe methods are sensitive and reliable , and can be used to control the quality of the pomegranate
Key words：Pomegranate; Gallic acid; TLC; HPLC
石榴为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥成熟果实。蒙药名为：阿纳尔、色布茹〔1～3〕，具有温中，消食，开胃，祛“巴达干”，止泻的功能。用于胃火衰退，“巴达干”病，恶心，消化不良，肺、肝、肾“赫依”，寒泻，腹胀嗳气等〔1，2〕。石榴中含有鞣质类、黄酮类等成分，鞣质是石榴中最普遍的一类化学成分〔4，5〕。为控制其质量，本文用薄层色谱法对没食子酸进行定性鉴别，采用反相高效液相色谱法测定了5批不同产地石榴中没食子酸含量，以期为石榴质量控制提供可靠的依据。
1 仪器与试药
依利特高效液相色谱仪（大连依利特科技有限公司），P230高压恒流泵，UV230+紫外-可见紫外检测器，EC2000色谱数据处理系统。十万分之一、万分之一电子天平（梅特勒-托利多公司）。没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110831-200302）；石榴药材（四川、云南两个产地,5个批次）；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别取本品粉末（过2号筛）2 g，置具塞锥形瓶中，加入水50 ml，静置约12 h，加热回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至5 ml，取上清液，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法〔6〕实验，吸取上述供试品溶液8～10 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶GF254板上，以环己烷-醋酸乙酯-甲酸-水（5：7：2：3）上清液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱为 Sinochrom ODS-bp C18柱 （4.6 mm ID ×250 mm ，5 μm）；ODS 预柱；流动相为甲醇-0.5%磷酸（5∶95）；流速为1 ml・min-1；检测波长为273 nm；柱温为室温；没食子酸峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5；理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于5×103。
2.2.2 对照品溶液的制备取没食子酸对照品约5 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，制成46.20 μg ・ml-1的溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末（过2号筛）1 g，置具塞锥形瓶中，加入水50 ml，静置约12 h，加热回流3 h，滤过，取续滤液，测时再用微孔滤膜滤过，即得。
2.2.4 线性关系考察分别精密吸取0.046 2 mg・ml-1的没食子酸对照品溶液1.0 ，2.0 ，3.0 ，4.0，5.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按“2.2.1”项色谱条件下，分别进样20 μl，测定各自的峰面积。
以浓度（C）为纵坐标，峰面积值（A）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为： C = (1.514 4 e-002)×A ＋（8.091 6 e-003），r = 0.999 8。
结果表明，没食子酸的浓度在4.62～23.10 μg・ml-1范围内与峰面积值呈良好的线性关系。