肠胃宁胶囊的质量标准研究(一)

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【摘要】 　　目的研究肠胃宁胶囊的质量标准。方法建立黄芩、甘草、白芍的薄层色谱鉴别方法，建立黄芩苷的高效液相色谱含量测定方法，流动相为甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2），紫外检测器，检测波长为315 nm，流速为1 ml・min-1，理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。结果薄层色谱中能检出黄芩、甘草、白芍，薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；黄芩苷在100 ～ 2 500 ng范围内线性关系良好，回归方程为 lgy = 0.933 2 lgx-2.864 1，r=0.999 2，平均加样回收率为99.28％，RSD为1.77％（n=5）。 结论方法简便，可控，适用于肠胃宁胶囊的质量控制。

【关键词】 肠胃宁胶囊 质量标准 薄层色谱 高效液相色谱 黄芩苷

　　Abstract：ObjectiveTo study the quality standards for Changweining Capsules.MethodsThe TLC methods for identification of Radix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba were established. A simple HPLC was established for the determination of baicalin. The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid (45∶55∶0.2). ResultsRadix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba could be detected. The blackspots were clear on the thin-layer chromatography and the negative sample was no interference. Baicalin showed a linear relationship within the concentration range of 100 ～ 2500 ng, r=0.999 2. The average recovery was 99.28% and RSD was 1.77% (n=5).ConclusionThe method is suitable for the quality control of Changweining Capsules.

　　Key words：Changweining； Quality standards； TLC； HPLC； Baicalin

　　肠胃宁胶囊是河北医科大学正在研究开发的五类新药，由黄芩、甘草（炙）、白芍等药组成，具有清热止痢、缓急止痛之功效，对于治疗肠炎、痢疾、腹泻等疾病有较好的疗效，现已申报国家专利。为更好地控制该产品的内在质量，本实验对肠胃宁胶囊中黄芩、甘草、白芍3味药材进行薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对方中君药黄芩中活性成分黄芩苷进行测定，为该制剂建立完善的质量标准提供依据。

　　1 仪器与试药

　　LC100液相色谱仪系列（美国Perkin-Elimer 公司）；Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）； BS223S电子天平（德国Sartorius公司）；λ-2紫外分光光度仪（美国Perkin-Elemer公司）；KQ-250E超声波清洗器（昆州市超声仪器有限公司）；PWUV超纯水机（上海力康发展有限公司）。

　　黄芩苷（批号：110715-200212），芍药苷（批号：110736-200220），黄芩对照药材（批号：120955-200305），白芍对照药材（批号：120905-200106），甘草对照药材（批号：120904-200410），均购自中国药品生物制品检定所；甘草酸（Sigma公司）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。肠胃宁胶囊：自制。

　　2 方法与结果

　　2.1 薄层色谱鉴别

　　2.1.1 黄芩的鉴别取本品和阴性样品各1 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml，用水饱和正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤3次，20 ml/次，弃去水洗液，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液和阴性溶液。另取黄芩对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液, 置紫外灯（365 nm）下检视见图1。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。

　　2.1.2 甘草的鉴别取甘草阴性样品和对照药材各1 g，按“2.1.1”项下的供试品溶液制备方法制备，作为甘草阴性溶液和对照药材溶液。另取甘草酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取“2.1.1”项下的供试品溶液和甘草阴性溶液及对照药材溶液、对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上。以正丁醇-醋酸-乙醇-水（6∶1∶1∶4）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视见图2。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。

　　2.1.3 白芍的鉴别取本品和阴性样品各1 g，加乙醇20 ml,超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml溶解，用乙醚萃取2次，20 ml/次，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤3次，15 ml/次，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液和阴性溶液。另取白芍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8∶1∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5 min，日光下检视见图3。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。

　　图1 肠胃宁胶囊中黄芩的薄层色谱图（略）

　　图2 肠胃宁胶囊中甘草的薄层色谱图（略）

　　图3 肠胃宁胶囊中白芍的薄层色谱图（略）

　　2.2 含量测定

　　2.2.1 对照品溶液的制备精密称取真空干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加无水乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。

　　2.2.2 供试品溶液的制备取本品内容物，研细(过3号筛)，取细粉0.85 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加无水乙醇约20 ml，超声提取20 min，取出，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀；精密吸取该溶液1 ml置50 ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

　　2.2.3 检测波长的选择取黄芩苷对照品适量，用无水乙醇溶解，制成溶液，在190～800 nm 进行了光谱扫描，结果表明黄芩苷无水乙醇溶液在315 nm 左右有最大吸收，因此选择315 nm作为测定的吸收波长。

　　2.2.4 色谱条件色谱柱为Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；流速1 ml・min-1；检测波长315 nm；柱温40 ℃；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。

　　2.2.5 阴性实验按照本品的处方、制法制备缺少黄芩的阴性样品，精密称取0.5 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。将黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液分别注入高效液相色谱仪中，进行测定，得到色谱扫描图，见图4。可见供试品与对照品溶液在相应的位置上有相似的峰，而阴性对照则无明显其它峰出现。