快速提取及测定紫油厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究(一)

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作者：刘晓鹏，姜宁，向东山，周大寨，张驰，吴永尧

【关键词】 厚朴酚；,,和厚朴酚；,,萃取；,,反相高效液相色谱；,,含量

　　摘要：目的研究厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的快速提取及测定。方法采用正交实验用ASE300快速溶剂萃取机进行提取方法的研究，用HPLC法厚朴酚及和厚朴酚的含量测定，流动相为甲醇水冰醋酸（85∶15∶0.25），流速为1.0 ml/min，检测波长为294 nm，柱温为23℃。结果研究表明，用60%的乙醇，71℃的提取温度在快速萃取系统提取3次（10 min/次），厚朴中的厚朴酚、和厚朴酚以及总酚的提取率分别为94.59%，85.45%和88.81%；RP-HPLC方法较好，结果理想。结论 该研究得到了很好的快速提取及测定厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的方法。

　　关键词：厚朴酚； 和厚朴酚； 萃取； 反相高效液相色谱； 含量

　　A Study on The Extracting and Determining Method for Magnolol and Honokiol in Magnolia offcinalis Rend et Wils

　　Abstract：ObjectiveTo Study the quick extracting and determining methods for Magnolol and Honokiol in Magnolia offcinalis Rend et Wils.MethodsThe method of extracting Magnolol and Honokiol was extraction with the ASE300 system by orthoplan and the method of determination was deteminedby HPLC.Results60% alcohol and extracting three times for ten minutes each time at 71℃ was the optimal extracting coondition. The RP-HPLC was simple,rapid and aurate.ConclusionThe extracting and determining methods are practicale for Magnolol and Honokiol in Magnolia offcinalis Rend et Wils.

　　Key words：Magnolol； Honokiol； Extraction； RPHPLC； Content

　　厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia offcinalis Rend et Wils的干皮、根皮或枝皮(称枝，性温味苦辛，无毒，入脾、胃、大肠经，能温中下气，燥湿消痰。厚朴是一种极为重要的中药材。厚朴在我国已有两千多年药用历史，用于治疗多个系统和器官的疾病，我国很多民间验方如厚朴三物汤、平胃散、大承气汤、四七汤和栀子厚朴汤中都含有生药厚朴；2005版《中国药典》Ⅰ部中有包括藿香正气水、香砂养胃丸、开胸顺气丸、柴胡舒肝丸等20多个常用中成药的主要原料药均含厚朴〔1〕。现代药理学研究表明,厚朴具有抗菌、抗病毒、抗过敏、影响胃肠活动、肌肉松弛和中枢抑制等作用〔2〕。厚朴药材中含酚性化合物9种，挥发油成分30种，生物碱9种以及其它一些化学成分。其中，厚朴酚及其异构体和厚朴酚占绝对优势。这两种酚的含量是评价厚朴药材品质优劣的标志〔3〕。2005版《中国药典》规定，厚朴中酚含量大于2%为合格品（采用《中国药典》的HPLC法测定）《中国药典》提取方法为甲醇浸渍24 h，方法虽然简单，但提取率以及准确度有限且费时，全面提取及测定其有效成分含量是一项重要而有意义的工作。本研究利用美国DIONEX公司的快速萃取系统及HPLC系统，进行了快速准确提取及测定厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究，结果理想，报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与试剂厚朴皮取自湖北恩施市双河乡，为紫油厚朴的干燥发汗树皮。提取用无水乙醇、甲醇为分析纯，HPLC甲醇为色谱纯， 厚朴酚、和厚朴酚标准品由中国药品生物制品检定所提供。

　　1.2 仪器美国DIONEX公司ASE300型加速溶剂萃取机，66 ml萃取池；美国DIONEX公司P680LPG型高效液相色谱仪；RE52型旋转蒸发仪。

　　1.3 方法

　　1.3.1 厚朴皮中酚类物质的全提取取干燥的发汗厚朴皮,粉碎，过60目筛，取适量用无水乙醇于索氏抽提器中提取至无色为止；用旋转蒸发仪浓缩后定容,取样用甲醇稀释10倍后进行HPLC测定含量，3次重复。

　　1.3.2 厚朴皮中酚类物质的快速萃取采用正交实验L9（34）用ASE300型快速溶剂萃取机进行提取方法的研究，正交实验的因素水平表见表1；取前述干燥的厚朴皮粉，按4∶1的比例加入硅藻土混匀后装入萃取池，编程进行萃取实验（萃取压力均为1500 psi）,萃取结束后定容萃取液并取样，用甲醇稀释10倍后进行HPLC测定含量。

　　表1 因素水平表（略）

　　1.3.3 色谱条件与系统适用性实验色谱柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇水冰醋酸(85∶15∶0.25)，流速1.0 ml/min，检测波长294 nm，柱温23℃，进样量20 μl。

　　1.3.4 线性范围考察精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每毫升含厚朴酚以及和厚朴酚均为400，200，100，50，25，12.5，6.25 μg的标准品浓度梯度，分别吸取溶液20 μl ，注入HPLC仪测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

　　1.3.5 精密度实验取厚朴酚以及和厚朴酚浓度为100 μg/ml的对照品溶液，重复进样6次，记录色谱峰面积，计算RSD。

　　1.3.6 重复性实验取索氏提取的一个样品，依法平行测定5次，记录厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面积，计算RSD。

　　1.3.7 稳定性实验取索氏提取的一个样品，每隔2 h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定性。

　　1.3.8 回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适量，依RPHPLC法测定，计算回收率，RSD。