骨髓CD117+Lin-细胞移植对小鼠酒精性肝纤维化的影响(一)

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作者：廖彩佶，廖彩仙，张守华，张春兴，赖勇强

【摘要】 目的 探讨骨髓源性肝干细胞（BMDLSC）移植对肝纤维化病变的影响。方法 16只酒精性肝纤维化雌性小鼠随机分为移植组和对照组，移植组小鼠（n=8）接受同基因型雄性小鼠的骨髓CD117+Lin-细胞移植，对照组小鼠（n=8）接受等体积的Buffer2液输注。术后30天活杀小鼠进行肝功能、肝组织HE染色和VG染色、肝组织Y染色体和白蛋白双重原位杂交等检查。结果 移植组的肝功能和肝结构恢复显著优于对照组,肝内纤维数量显著少于对照组，既带Y染色体又表达白蛋白的双阳性细胞仅在移植组的肝组织中出现。结论 BMDLSC移植可以显著改善小鼠酒精性肝纤维化病变的结构与功能。

【关键词】 CD117+Lin-细胞移植；酒精性肝纤维化；小鼠

【Abstract】 Objective To explore the action of transplantation of bone marrow-derived liver stem cells（BMDLSC）on hepatic fibrosis induced by alcohol in mice. Methods 16 female mice with alcoholic liver fibrosis were randomly divided into group A and B. The mice in group A(n=8) received syngeneic male bone marrow CD117+Lin- cell transplantation. The mice in group B(n=8) received isovolumetric Buffer 2 solutions infusion. The examinations of hepatic function, hepatic tissue stained by HE and VG, double in situ hybridization of albumin and Y-chromosome were performed at the 30th day postoperatively.Results Double labelling positive cells were seen only in group A. The hepatic function and morphosis restoration in group A were significantly better than those in group B. The number of intrahepatic fibers in group A were markedly less than those in group B. Conclusion BMDLSC transplantation could ameliorate remarkably the hepatic structure and function of the mice with alcoholic liver fibrosis.

【Key words】 CD117+Lin- cell transplantation; alcoholic liver fibrosis; mouse

最近唐浩等〔1〕学者发现，小鼠骨髓源性肝干细胞（BMDLSC）移植对放射性肝损伤具有良好的修复作用，并且可以有效预防放射性肝纤维化形成。但是，对于已经出现的肝纤维化病变，BMDLSC移植可否使其发生变化？目前尚不清楚，也未见报道。笔者为此对肝纤维化小鼠接受骨髓CD117+Lin-细胞移植后的变化进行了观察，发现骨髓CD117+Lin-细胞移植可以显著改善小鼠酒精性肝纤维化病变的结构与功能。

1 材料与方法

1.1 小鼠酒精性肝纤维化模型的建立 SPF级纯系BALB/C雌性小鼠，体重15～18g。参照苏俊等〔2〕介绍的方法，给予54度白酒灌胃，每天2次，持续16周。第1～3周每次8ml/kg白酒灌胃，第4～7周每次10ml/kg，第8～16周每次12ml/kg。同时将54度白酒用蒸馏水配制成含酒精10% (v/v)白酒作为实验小鼠的唯一饮料。

1.2 小鼠分组 （1）移植组:为酒精性肝纤维化雌性小鼠接受同系雄性小鼠骨髓CD117+Lin-细胞移植组，8只小鼠。（2）对照组:为酒精性肝纤维化雌性小鼠接受等体积Buffer2液输注组，8只小鼠。

1.3 小鼠骨髓CD117+Lin-细胞分选 BALB/C雄性小鼠8只，无菌条件下获取股骨和胫骨骨髓，收集骨髓细胞悬液。经裂解红细胞、8℃条件下离心、尼龙膜过滤等处理，获得骨髓细胞悬液。应用免疫磁珠分选法〔3〕，第一步采用阴性分选，从骨髓细胞悬液中分选出Lin-细胞，即CD3ε、CD4、CD8a、CD45R、Gr21、Ter-119、CD11b阴性细胞。第二步采用阳性分选，从Lin-细胞中分选出CD117+Lin-细胞。最后用Buffer2液（pH7.2 PBS+0.5%BSA +2mmol/L EDTA）重悬细胞，并将细胞浓度调节至1×109/L。

1.4 CD117+Lin-细胞移植 移植组小鼠均经尾静脉注入CD117+ Lin-细胞悬液250μl(2.5×105个细胞)，对照组小鼠均经尾静脉注入250μl Buffer2液。

1.5 观察指标与检测方法 移植后30天，活杀小鼠进行如下检测。

1.5.1 肝功能测定 内容包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、 天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)。

1.5.2 肝组织病理学检查 内容包括HE染色和VG染色检查。