VEGF和E-cadherin在胃癌中的表达及意义(一)

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作者：罗秉庆，郑绍光，唐青梅，龚广

【摘要】 目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）和钙粘附分子（E-cadherin，E-cad）在胃癌中的表达及意义。方法 应用核酸原位杂交方法检测62例胃癌组织中VEGF和E-cad mRNA表达情况。结果 62例胃癌中VEGF和E-cad mRNA阳性表达率分别为90.32％（56/62 ）和32.26％（20/62 ），VEGF mRNA在胃癌中的阳性表达率显著高于正常胃粘膜上皮组织；E-cad mRNA阳性表达率显著低于正常胃粘膜上皮组织(P0.01)。VEGF mRNA高表达和E-cad mRNA低表达与胃癌组织分化、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.01)。胃癌中VEGF和E-cad mRNA表达呈负相关(P＜0.01)。结论 VEGF mRNA过表达与 E-cad mRNA失活可加速胃癌的浸润转移。VEGF和E-cad mRNA检测可作为评价胃癌的恶性程度和判断预后的重要指标。

【关键词】 胃肿瘤；肿瘤转移；血管内皮生长因子；钙粘附分子；原位杂交

　　Abstract： Objective To assay vascular endothelial growth factor (VEGF) and E-cadherin (E-cad) expression and outline their clinical significances. Methods A situ hybridization was used to detect the expression of VEGF and E-cad mRNA in 62 patients with stomach cancer. Results The positive rates of VEGF and E-cad mRNA in 62 sample tissues of stomach cancer were 90.32% (56/62) and 32.26% (20/62).The VEGF mRNA staining was more strong in stomach cancer cells than normal gastric mucosa，and the E-cad mRNA staining was weaker (P0.01).The high expression of VEGF mRNA and the low expression of E-cad mRNA are positively correlated with the differentiation of cancer tissues，the TNM stage and the metastasis of lymph node (P0.01).In stomach cancer，the expression of VEGF mRNA is adversely associated with E-cad mRNA expression (P0.01). Conclusion Over expression of VEGF mRNA and inactivation of E-cad mRNA enhance the infiltration and metastasis of stomach cancer.Detecting of VEGF and E-cad mRNA can be served as significant markers for eva luating the malignance and prognosis of stomach cancer.

　　Key words： stomach neoplasms; neoplasm metastasis; vascular endothelial growth factors; E-cadherin; in situ hybridization

　　癌的侵袭转移是多阶段的复杂过程，肿瘤新生血管的形成和细胞粘附系统的崩溃导致癌细胞脱离母癌是始动侵袭转移的关键〔1，2〕。血管内皮生长因子(VEGF)能促进新生血管的形成，肿瘤新生血管的形成在为肿瘤细胞生长提供养分时，也为肿瘤侵袭转移创造了条件，而肿瘤新生血管一旦被启动，便会无限制地增生且不受机体制约〔3〕。钙粘附分子(E-cadherin)代表一组参与细胞间或细胞与基质间作用的细胞表面分子，其表达丧失会导致肿瘤细胞脱离癌灶，启动转移和浸润〔4〕。我们应用核酸原位杂交技术，检测胃癌中VEGF和 E-cad mRNA的表达水平，探讨它们对胃癌生物学行为的影响及临床病理意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料 收集柳州医专一附院及柳州市肿瘤医院病理科2000～2005年资料完整的胃癌标本62例，其中男41例，女21例，年龄33～72岁，平均53.5岁。所有患者术前均未接受化疗和放疗。术后经病理明确诊断，其中高分化腺癌3例，中分化腺癌24例，低分化腺癌27例，粘液腺癌（含印戒细胞癌）8例。TNM分期：T1期6例，T2期11例，T3期27例，T4期18例，有淋巴结转移38例，无淋巴结转移24例。以20例癌旁正常胃粘膜上皮组织为对照。

　　1.2 核酸原位分子杂交（in situ hybridization，ISH） 切片经二甲苯脱蜡入水，50μg/ml蛋白酶K消化，经4％多聚甲醛 0.1mol/L PBS（pH7.4 ）固定10min，0.1mol/LPBS（pH 7.4）摇洗5min×3次，暴露mRNA 核酸片段，预杂交后，用地高辛随机引物标记寡核苷酸探针VEGF、E-cad杂交，再滴加生物素化地高辛检测系统，DAB显色。VEGF和E-cad探针、探针标记及原位杂交试剂盒均购自武汉博士德公司，探针标记、杂交、杂交后检测程序按试剂盒说明书进行。杂交时设不加探针和不加抗辣根过氧化物酶抗体的对照片作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。

　　1.3 结果判断 杂交阳性信号为棕黄色颗粒，定位于细胞质。根据染色强度及显色细胞比例，将染色结果分为：阴性（－）、阳性（＋）、强阳性（＋＋）。①按切片中细胞有无显色及深浅评分：无显色为0分，棕黄色为1分，棕褐色为2分。②根据显色细胞的比例评分：＜ 30％为 1分，30％～70％为 2分，＞ 70％为3分。以上2种评分之和为每例的积分。按积分高低分为：0分为阴性（－），1～3分为阳性（+），4～6分为强阳性（++）。

　　1.4 统计学处理 计数资料采用χ2检验，由SPSS 10.00版本统计软件处理。

　　2 结果

　　2.1 VEGF、E-cad mRNA在正常胃粘膜上皮和胃癌不同病理分型中的表达 见表1。VEGF、E-cad mRNA 阳性定位于胞质(见图1、图2)。VEGF mRNA在正常胃粘膜上皮呈阴性表达，在胃癌中的阳性表达率为90.32%(56/62)，显著高于正常胃粘膜(P0.01)。E-cad mRNA在正常胃粘膜上皮阳性表达率为100%（20/20）（见图3），在胃癌中的阳性表达率为32.25%(20/62)。显著低于正常胃粘膜（P＜0.01)。

　　2.2 VEGF、E-cad mRNA 在胃癌不同临床分期中的表达 见表2。VEGF mRNA高表达和 E-cad mRNA低表达与胃癌TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.01)。

　　表1 VEGF、E-cad mRNA在正常胃粘膜和胃癌不同病理分型中的表达（略）

　　注：与正常胃粘膜比较，a：χ2=56.97，b：χ2＝56.97，P均＜0.01

　　图1 中分化腺癌VEGF mRNA 呈强阳性表达。SP×100（略）

　　图2 中分化腺癌E-cad mRNA 呈强阳性表达。SP×100（略）

　　图3 正常胃粘膜上皮E-cad mRNA呈强阳性表达。SP×100（略）

　　表2 VEGF、E-cad mRNA在胃癌不同临床分期中的表达（略）

　　注：T3、T4与T1、T2比较，χ2＝13.78，P＜0.01，转移与无转移比较，χ2＝7.85，P＜0.01