血栓性心脑血管疾病与血小板微颗粒及其膜功能蛋白表达的关系(一)
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作者：苏冰，王前，孙德华，曾芳银，刘飞，张梦宇，齐涛
【关键词】 脑血管疾病；心血管疾病；血小板微颗粒；流式细胞术；CD62P,GPIIb/IIIa
【Abstract】 AIM: To detect platelet microparticle (PMP), glycoprotein IIb/IIIa (PAC1) and Pselection (CD62P) using whole blood flow cytometry (WBFCM) in whole blood before and after the treatment in patients with ischemic cardiovascular and cerebrovascular diseases and the activation ratio of PAC1 and CD62P, and to explore the role of PMPs, PAC1 and CD62P in the pathogenesis of thrombotic cardiovascular and cerebrovascular diseases as well as the clinical significance of detecting PMP and activation ratio of PAC1 and CD62P in whole blood in the prediction of illness state and in the prognostic eva luation. METHODS: The quantity of PMP and activation ratio of CD62P and GPIIb/IIIa were measured before and after the treatment of patient group and control group using flow cytometry. RESULTS: ① Control group PMP: (65.5±9.8)/104Plt, CD62P: (3.2±0.8)%, PAC1: (7.0±1.0)%; PMP:(64.3±8.3)/104Plt, PAC1:(6.8±0.7)%, CD62P: (3.0±0.7)%, PMP:(64.3±8.2)/104Plt, PAC1:(6.8±0.7)%, CD62P:(3.0±0.7)%; ② Before treatment of patient group(with thrombotic cardiovascular disease): PMP:(209.2±21.9)/104Plt, CD62P: (54.7±7.8)%, PAC1:(87.4±7.1)%; After treatment: PMP:(117.9±11.9)/104Plt, CD62P:(25.2±6.3)%, PAC1:(46.2±5.1)%; They were significantly higher than those in control group(P0.01), and significantly lower after treatment of patient group than before treatment(P0.01). ③ Before treatment of patient group(with thrombotic cerebrovascular disease): PMP:(217.3±36.6)/104Plt, CD62P:(52.8±9.3)%, PAC1:(79.9±6.8)%; After treatment: PMP:(134.2±12.9)/104Plt, CD62P:(24.3±6.1)%, PAC1:(42.2±5.1)%; They were significantly higher than those in control group(P0.01), and significantly lower after treatment of patient group than before treatment(P0.01). CONCLUSION: The levels of PMP, PAC1 and CD62P can be taken as the specificity indices for the eva luation of therapeutic efficacy, prognostic judgement and clinical diagnosis. And it provides theoretical basis for the longterm medication therapies for cardiocerebrovascular diseases.
【Keywords】 cerebrovascular disease; cardiovascular disease; plateletderived micropartisles; flow cytometry; CD62P; GPIIb/IIIa
【摘要】 目的： 运用以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测血小板微颗粒(PMP)方法，检测观察血栓性心脑血管疾病患者治疗前后PMP及其表面膜糖蛋白GPIIb/IIIa(PAC1)及P选择素(CD62P)的活化比率的变化；探讨PMP及PAC1及CD62P活化比率检测在血栓性心脑血管疾病发病机制中的作用及其在病情预测和预后评价中的意义. 方法： 采用流式细胞仪分别对正常对照组、治疗前和治疗后血栓性心脑血管疾病组进行测定，分析各组PMP表达状况， CD62P, GPIIb/IIIa活化比率. 结果： ① 正常对照组PMP： (65.5±9.8)/104Plt, CD62P： (3.2±0.8)%, PAC1: (7.0±1.0)%; PMP:(64.3±8.3)/104Plt, PAC1:(6.8±0.7)%, CD62P:(3.0±0.7)%, PMP:(64.3±8.2)/104Plt, PAC1:(6.8±0.7)%, CD62P:(3.0±0.7)%；② 血栓性心血管疾病组治疗前PMP:(209.2±21.9)/104Plt, CD62P:(54.7±7.8)%, PAC1:(87.4±7.1)%；治疗后PMP:(117.9±11.9)/104Plt, CD62P:(25.2±6.3)%, PAC1:(46.2±5.1)%；两者的PMP, CD62P, PAC1水平均较正常对照组有显著性升高(P0.01)；治疗后较治疗前有显著性下降(P0.01). ③ 血栓性脑血管疾病组治疗前PMP:(217.3±36.6)/104Plt, CD62P:(52.8±9.3)%, PAC1:(79.9±6.8)%; 治疗后PMP:(134.2±12.9)/104Plt, CD62P:(24.3±6.1)%, PAC1:(42.2±5.1)%；两者的PMP, CD62P, PAC1水平均较正常对照组有显著性升高(P0.01)；治疗后较治疗前有显著性下降(P0.01). 结论： PMP及其表面膜糖蛋白PAC1及CD62P表达的检测可作为血栓性心脑血管疾病疗效及预后判断的临床辅助诊断特异性指标之一，并为心脑血管疾病患者长期药物治疗提供理论依据.
【关键词】 脑血管疾病；心血管疾病；血小板微颗粒；流式细胞术；CD62P GPIIb/IIIa
0引言
心脑血管疾病是严重威胁人类健康的疾病，其死亡率、致残率居各种病因之首. 大量研究证明循环血小板活化升高与血栓性心、脑血管疾病的发病机制密切相关〔1-5〕. 血小板在正常的循环血液中处于静息状态，当血管内皮损伤或在某些生理或病理因素作用下，血小板发生活化反应，导致动脉内血栓形成. 近年来发展的流式细胞术(FCM)测定活化血小板膜糖蛋白为评价血小板在体内的活化程度提供了准确特异性的指标. 本研究我们建立了全血法测定血小板微颗粒PMP的方法，同时检测GPIIb/IIIa/CD62P的表达，并深入研究血小板活化在血栓性心脑血管疾病中的重要作用，为临床患者诊断、疗效观察及指导临床用药等方面提供理论依据.
1材料和方法
1.1材料PAC1 FITC为异硫氰酸荧光素标记的抗血小板活化GPIIb/IIIa，即纤维蛋白原受体(FibR)的McAb; CD62p PE为藻红蛋白标记的抗P选择素的McAb; CD41a PerCP为多甲藻素叶绿素标记的抗血小板GPIIb/IIIa抗体(均购自美国BD公司)；流式细胞仪三色校准微球(CaliBRITE 3 Kit)美国BD公司；多聚甲醛(PFA)分析纯，天津科密欧化学试剂开发中心；PBS磷酸盐缓冲液，pH 7.2德国医学实验诊断有限公司；FACSFlowTM鞘液美国BD公司；FACS Calibur流式细胞仪、Falcon上样管及CTAD真空采血管（内含潘生丁防止血小板体外活化），均为美国BD公司产品.
1.2方法
1.2.1研究对象① 正常对照组： 门诊健康查体30(男15，女15)例，平均年龄30岁. 体检正常，既往无心脑血管、高血压、糖尿病病史，测定前2 wk内未服用影响血小板功能的药物. ② 心血管疾病组： 冠心病患者40(男25，女15)例，年龄(55±8)岁，其中不稳定性心绞痛(UA)20例，稳定性心绞痛(SA)10例，心肌梗死(MI)10例，均符合WHO制定的血栓性心脏病的诊断标准，患者入院前无服药史. ③ 脑血管疾病组：患者38（男24，女14）例，年龄(65±8)岁，均符合全国第四届脑血管病会议制定的血栓性脑血管疾病诊断标准, 患者入院即刻采血，经住院治疗后3 wk病情有明显缓解再次采血.
1.2.2样本采集各组患者及正常对照的样本采集均用CTAD真空采血管采集的静脉血样2.7 mL. 弃去前2 mL混有组织液的血液，将剩余样本用枸橼酸钠抗凝，轻轻混匀， 取10 μL全血样本备用. 心血管疾病组及脑血管疾病组患者采入院时的静脉血以及经治疗后3wk症状缓解时的静脉血.