HPLC法测定辐花中獐牙菜苦苷的含量(一)

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作者：张秀桥,黄凤娇,陈家春,刘焱文

【摘要】 目的 建立辐花中獐牙菜苦苷含量测定的方法。方法 用高效液相色谱法,色谱柱为Alltimal C18(5 μm, 250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长234 nm,柱温30 ℃。结果獐牙菜苦苷在3.10～30.98 μg范围内线性关系良好,相关系数为0.999 1；平均回收率为98.0%,RSD＝2.66%(n＝6)。结论 该方法操作简便,分离度好,为建立其质量标准提供了实验依据。

【关键词】 辐花；高效液相色谱法；獐牙菜苦苷；含量测定

Abstract：Objective To establish a method for content determination of swertiamarin in Lomatogoniopsis alpina. Methods HPLC method for determination was used. Chromatographic column： Alltimal C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm). Mobile phase： methanol-water (including 0.05% H3PO4), and gradient elution. Flow rate：1 mL/min. Wavelength：234 nm. Column temperture：30 ℃. Results The calibration curve of swertiamarin was in good linearity over the range of 3.10～30.98 (r=0.999 1). The average recoveries were 98.0%, with RSD＝2.66% (n＝6). Conclusion It is a simple and sensitive method in controlling the quality of Lomatogoniopsis alpina.

　　Key words：Lomatogoniopsis alpina；HPLC；swertiamarin；determination

辐花来源于龙胆科辐花属植物Lomatogoniopsis alpina T.N.Ho et S.W.Liu,主要产于西藏东北部、青海南部及四川等地,生于云杉林缘、阴坡草甸及灌丛草甸中。辐花是国务院于1999年8月4日批准的《国家重点保护野生植物名录(第一批)》保护级别为Ⅱ级的品种之一。为了变野生为家种,为建立其质量标准提供实验依据,本试验用HPLC法测定了辐花中獐牙菜苦苷(swertiamarin)的含量。

　　1 仪器与试药

　　美国Agilent1100高效液相色谱仪(G1311A泵、柱温箱、G1316A紫外检测器、Shemstation色谱工作站),Sartorius BP211D分析天平。

　　药材采自四川省阿坝州金川县俄热,经华中科技大学同济医学院陈家春教授鉴定为龙胆科辐花属植物Lomatogoniopsis
alpina T.N.Ho et S.W.Liu。

　　对照品獐牙菜苦苷自提,HPLC归一法测定纯度>98%。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,均经0.45 μm滤膜滤过。

　　2 方法和结果

　　2.1 色谱条件及系统适应性试验

色谱柱为Alltimal C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相为甲醇-水(水中含0.05%磷酸),梯度洗脱,0～25 min,甲醇由20%增至50%；25～35 min,甲醇由50%增至60%；流速1 mL/min。检测波长234 nm,柱温30 ℃。理论塔板数均>104,对称因子0.95～1.05。色谱图见图1。

　　2.2 供试品溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　分别精密称取对照品獐牙菜苦苷一定量,混合后用甲醇超声溶解并定容,制成浓度分别为1.549 mg/mL的溶液,经0.45 μm滤膜滤过,滤液作为对照品溶液。