定喘汤对哮喘大鼠肺组织和胸腺神经生长因子表达的影响(一)

详细内容

作者：李杰,伍参荣,陈伶利,李继红,姜晓,陈北阳

【摘要】 目的 探讨定喘汤对哮喘大鼠肺组织及胸腺神经生长因子(NGF)表达的影响。方法 将Wistar大鼠32只随机分为正常对照组、模型组、定喘汤组、必可酮组,每组8只。除正常对照组外,其余各组制备哮喘模型,并分别用药,共15 d。采用免疫组织化学方法,观察大鼠肺和胸腺NGF表达的变化。结果 模型组大鼠NGF在肺组织和胸腺表达明显高于正常对照组,而定喘汤组则明显低于模型组。结论 NGF可能参与哮喘的发病过程,定喘汤抑制哮喘大鼠NGF的表达可能是其治疗哮喘的机制之一。

【关键词】 定喘汤；神经生长因子；肺；胸腺；哮喘；大鼠

Effect of Dingchuantang on Expression of NGF in Lung and Thymus of Asthmatic Rats

　　LI Jie, WU Can-rong, CHEN Ling-li, et al

　　Hunan University of TCM, Changsha 410007, China

Abstract：Objective To explore the effect of Dingchuantang on the expression of NGF in the lung and thymus of asthmatic rats. Methods Thirty two Wistar rats were randomly divided into control group, asthmatic group, Dingchuantang group and Beclomethasone group, 8 rats for each group. Asthmatic model was made except the control group. The change of NGF expression in the lung and thymus were observed by means of immunohistochemistry. Results The expression of NGF in the lung and thymus of asthmatic group was much higher than that of control group and that of Dingchuantang group was much lower than that of asthmatic group. Conclusion Over-expression of NGF might be involved in the pathogenesis of bronchial asthma, and inhibition of NGF expression by Dingchuantang may be one of the mechanisms in the treatment of asthma.

　　Key words：Dingchuantang；nerve growth factor；lung；thymus；asthma；rat

支气管哮喘是一种严重威胁人类健康的慢性呼吸道疾病,近年来其发病率和病死率呈上升趋势。在哮喘发病机制中,免疫细胞与神经元之间存在着广泛的联系,而神经生长因子(NGF)则可能是参与这一免疫神经机制的重要介质。中医药防治本病具有较好的临床疗效,但其治疗机理研究尚不深入。本研究通过观察哮喘大鼠肺组织和胸腺NGF表达及定喘汤对NGF表达的影响,探讨NGF在哮喘发病机制中的作用及定喘汤的平喘机制,为哮喘的治疗提供新的依据。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

Wistar大鼠32只,雌雄各半,体重120～150 g,清洁级,湖南中医药大学实验动物中心提供。合格证号：SCXK(豫2005-0001)。

　　1.2 主要试剂

　　卵清蛋白(OVA),美国Sigma公司产,北京天象人生物工程公司分装进口；NGF免疫组化试剂盒,武汉博士德生物工程公司提供。

　　1.3 仪器

超声雾化器为北京亚都YD-800型；多功能酶标仪为华东电子集团公司。

　　2 实验方法

　　2.1 分组和造模

按随机原则分为正常对照组、模型组、定喘汤组、必可酮组,每组8只。参照文献[1]方法,腹腔注射1 mL (50 μg)OVA和10 μg氢氧化铝悬液,1周后再注射1次,第4日后用10%OVA雾化吸入(每日1次,每次8～10 min,共12次),激惹大鼠。正常对照组吸入生理盐水,腹腔注入10 μg氢氧化铝悬液。

　　2.2 给药与标本采集

定喘汤组从第1次诱喘后每日用定喘汤的水煎液喷雾,每日2次。必可酮组每日用必可酮喷雾,每日2次。正常对照组用生理盐水灌胃。从首次诱喘到治疗结束共15 d,将大鼠用乌拉坦(1 g/kg)肌肉注射麻醉后,常规消毒。沿颈正中线剪开皮肤,切开气管,结扎右支气管,插管,用生理盐水灌洗4次,每次3 mL,回收全部的支气管肺泡灌洗液(BALF)6.5 mL,4 ℃条件下,1 000 r/min离心10 min,去上清液,-70 ℃保存。取胸腺和肺组织保存待用。

　　2.3 观察指标

　　2.3.1 支气管肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞计数

　　采用瑞氏姬姆沙染色,镜下计数200个白细胞数中的嗜酸粒细胞(EOS),求出百分率,进行统计分析。

　　2.3.2 肺组织和胸腺神经生长因子的测定

　　用4%多聚甲醛0.1 mL/mol PBS灌流固定后取下肺组织和胸腺,固定24 h后,移至30%的蔗糖缓冲液中,至标本沉底,OCT包埋,恒冷箱连续切片(片厚16 μm),冷风干燥后进行免疫组化染色(SABC法)。用图像分析系统对实验结果进行分析,计算光密度值。

　　3 统计学方法

　　用SPSS14.0统计软件对数据进行统计分析；多样本均数比较及两两比较分别采用F检验和t检验。

　　4 结果

　　(见表1、表2)表1 定喘汤对大鼠BALF中EOS数的影响(略)注：与模型组比较,*P＜0.05(下同)表2 各组大鼠肺组织和胸腺NGF阳性反应产物平均光密度值比较(略)