地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的高效液相色谱测定(一)
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【关键词】 地榆；,,乌索酸；,,齐墩果酸；,,高效液相色谱
摘要：目的建立地榆药材中乌索酸和齐墩果酸含量的测定方法。方法用高效液相色谱法。色谱柱为NovaPak C18 (3.9 mm×300 mm,4 μm),流动相甲醇水（88∶12)，检测波长210 nm。流速0.8 ml/min，柱温25℃ 。结果乌索酸进样量在0.106 2~1.593 μg，齐墩果酸进样量在0.040 6~0.609 μg时呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为99.73%和97.59%，RSD分别为1.5%和1.7%。结论方法灵敏、快速、准确，可用于地榆中乌索酸和齐墩果酸含量的测定。
关键词：地榆； 乌索酸； 齐墩果酸； 高效液相色谱
Determination of Ursolic Acid and Oleanolic Acid in Sanguisorba officinalis L. by HPLC
Abstract：ObjectiveTo develop an HPLC method for determination of ursolic acid and oleanolic acid in sanguisorba officinalis L.MethodsUrsolic acid and oleanolic acid was separated and analyzed on Nova-Pak C18 column (3.9 mm×300 mm, 4 μm) with methanol-water (88:12) as mobile phase at flow rate of 0.8 ml/min. UV detection was at 210 nm and the column temperature was 25℃. ResultsAn average recovery of 99.73% was obtained with a RSD of 1.5% in the range of 0.106 2~1.593μg for ursolic acid. An average recovery of 97.59% was obtained with a RSD of 1.7% in the range of 0.040 6~0.609 μg for oleanolic acid.Conclusion The method was proved to be stable, fast, aurate and can be used for determination of ursolic acid and oleanolic acid in sanguisorba officinalis L..
Key words：Sanguisorba officinalis L.； Ursolic acid； Oleanolic acid； HPLC
地榆Sanguisorba officinalis L.是蔷薇科植物地榆的干燥根，在我国主要分布于江苏、湖南、安徽、甘肃、陕西等省〔1〕。地榆具有多种药用价值，能够凉血、止血、抗菌、解毒、止吐等，地榆炭粉对烫伤具有良好的治疗效果〔2〕。研究表明，地榆根中含鞣质约7%、三萜皂苷2.4 %~4.0 %，已分离出地榆皂苷Ⅰ，Ⅱ(其苷元为19α羟基乌苏酸)和地榆皂苷B及E(其苷元为乌苏酸)〔3，4〕。本研究采用高效液相色谱法测定了地榆中乌索酸和齐墩果酸的含量，证实地榆中有游离态的乌索酸和齐墩果酸存在，为评价药材的内在质量提供了依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪，515型泵，2996光电二极管矩阵检测器(PAD)，柱温箱，Empower中文色谱工作站（美国）；CP225D分析天平（德国Sartorius公司）； UPWSI10T高纯水机（杭州永洁达膜分离设备厂）。
1.2 试药 甲醇，色谱纯（上海陆忠试剂厂）；乙醇为分析纯（江西同盟试剂厂）；水为高纯水；乌索酸、齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742200314，110709200304，供含量测定用)。地榆药材(市售)，经本所天然药物实验室鉴定为地榆Sanguisorba officinalis L.的根。
2 方法与结果
2.1 乌索酸和齐墩果酸检测波长的确定采用PAD检测器在190~500 nm波长范围内扫描，乌索酸和齐墩果酸对照品在流动相中的最大吸收波长均为202.2 nm（图1），但在低波长处，流动相有较强的末端吸收，经提取不同波长色谱比对，选取210 nm为检测波长，可在有效消除背景干扰时保证基线平稳和检测的灵敏度〔5〕。
图1 乌索酸和齐墩果酸对照品的紫外光谱图 (略)
2.2 色谱条件色谱柱：NovaPak C18 (3.9 mm×300 mm，4 μm，带保护柱)；流动相：甲醇水（88∶12）；检测波长：210 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：25℃；外标法定量分析，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10 000。对照品和地榆样品的HPLC色谱见图2。
a对照品 b地榆样品 1齐墩果酸 2乌索酸
图2 对照品和地榆样品的HPLC色谱(略)
2.3 标准对照品溶液配制 精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品10.62 mg，齐墩果酸对照品4.06 mg置10 ml容量瓶中，加入适量甲醇超声溶解，甲醇定容，作为乌索酸和齐墩果酸对照品混合储备溶液。精密吸取混合储备溶液1 ml至10 ml容量瓶中，加甲醇稀释，定容，制成含乌索酸0.106 2 μg/μl和齐墩果酸0.040 6 μg/μl的混合对照品溶液。