正交实验优化牛蒡子的提取工艺(一)
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作者：卢来春，张蓉，周世文，蒋学文
【关键词】 牛蒡子；牛蒡苷；正交设计
〔摘要〕 目的：优选牛蒡子乙醇提取的最佳工艺。方法：采用L9（34）正交试验筛选醇提工艺条件，用HPLC法测定牛蒡苷的含量。结果：牛蒡子的最佳醇提条件为：乙醇浓度70％，加8倍溶剂量，回流3次，回流时间1 h。结论：采用本工艺牛蒡子的活性成分牛蒡苷提取率达95.43%，工艺可行。
〔关键词〕 牛蒡子；牛蒡苷；正交设计
Optimization of the technology of extracting chemical constituents from fructus arctii by orthogonal experimental design
〔Abstract〕 Objective:To optimize the technology of extracting chemical constituents from fructus arctii. Methods: HPLC was used to analyze the content of Arctinin, and the L9 (34) orthogonal experimental design was used to optimize the conditions of the ethanol extraction technology. Results: The conditions of the ethanol extraction technology of extracting the constituents from Fructus arctii were 70 % ethanol, 1 hour of reflux, 8fold solvent and 3 times of extraction. Conclusions: With the extraction rate of arctiin as 95.43%, the optimized technology is stable and practical and worthy of a trial in pharmaceutical production.
〔Key words〕 Fructus arctii; Arctinin; Orthogonal experimental design
牛蒡子为菊科植物Arctium lappa L.的果实，味辛、苦，性凉，其富含牛蒡苷（arctinin）、牛蒡苷元（arctigenin）等成分。现代医学研究表明：牛蒡子醇提物有降血糖的作用，且治疗效果确切〔1，2〕。目前，临床上还没有专门供糖尿病儿童患者使用的降糖药物。牛蒡子为传统中药，毒副作用非常低，我们拟将其开发成供儿童用的糖尿病治疗药物，采用正交设计，以牛蒡苷为指标，优选出牛蒡子乙醇回流法的提取条件，为牛蒡子的工业化生产作研究。
1 仪器与材料
岛津LC10AT高效液相色谱仪（日本）；牛蒡子药材为菊科植物Arctium lappa L.的果实（购自重庆桐君阁中药批发有限责任公司，生产厂家为宜宾中药饮片厂，产地四川，批号050901，由重庆市药检所鉴定）；牛蒡苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号110819-200404，供含量测定用）；重蒸水自制，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 含量测定方法
2.1 色谱条件〔3〕DiamonsilTM ODS C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇∶水（1∶1.1）；测定波长280 nm；流速1 mL/min；进样量10 μL。
2.2 对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥24 h的牛蒡苷对照品13.92 mg，精密称定，置25.0 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为556.8 μg/mL的牛蒡苷对照品贮备液，于冰箱4 ℃保存备用。
2.3 线性范围考察分别精密量取对照品贮备液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，照上述色谱条件，进样10 μL，记录色谱图，以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：A=36369+211719.6C，r=0.9993，线性范围为0.557～4.456 μg。
3 牛蒡子提取方法的选择
各取牛蒡子药材100 g，石油醚脱脂后，分别按水煮、水煮醇沉及70%乙醇回流提取法处理（加溶媒量8倍，提取时间1 h，提取两次），浓缩，以牛蒡苷含量为指标测定，结果见表1。由表1可知，70％乙醇回流提取牛蒡苷效果最好。
表1 不同提取方法牛蒡苷含量的比较 略