高滴度天然抗角蛋白自身抗体对小鼠机体影响的初步分析(一)
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作者：郑力强，田蓉，李巍，付萌，邢影，王雷，顾伟杰，高天文，刘玉峰
【摘要】 目的： 探讨高滴度天然抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)对小鼠多器官系统的影响. 方法： AK auto Ab转基因小鼠及同窝对照小鼠于常规条件下饲养，观察小鼠体质量、生存时间等一般情况，Kaplan?Meier法绘制生存曲线. 取20周龄以上小鼠检测血常规和血生化值. 结果：与同窝对照小鼠相比，转基因小鼠体质量减轻(P0.001)，生存时间缩短（P0.05），脾肿大，肝脏、脾脏、肾脏与体质量的比值增大(P0.05）；血常规显示白细胞数降低，淋巴细胞数下降（P0.001）；血小板升高，血清总蛋白升高，尿素氮升高(P0.05）. 结论： AK auto Ab的过度表达可能对小鼠的机体造成一定的损害，对多器官系统也产生重要的影响. 本研究对于全面分析天然自身抗体的功能具有重要的意义.
【关键词】 天然自身抗体；角蛋白；疾病；小鼠，转基因
0引言
天然自身抗体（Natural auto?antibodies, NAA）广泛存在于正常人和多种动物体内，具有抗感染、免疫调节、肿瘤监视、维持内环境稳定等多方面的功能〔1-2〕，对机体具有重要的保护作用. 然而随着对NAA功能研究的进一步深入，大量证据发现，NAA具有潜在的病理意义〔1-4〕. 那么NAA对机体到底有利还是有害呢？目前尚无明确结论，这也是目前免疫学及相关学科关注的热点问题. 我们在前期工作中建立了天然抗角蛋白自身抗体(anti?keratin auto antibody, AK auto Ab)转基因小鼠，发现其具有增高的血清AK auto Ab滴度，为进一步研究AK auto Ab的功能提供了良好的模型. 我们长期观察了饲养于常规条件下的转基因小鼠及同窝对照小鼠，对20周龄以上小鼠的生理情况进行深入研究和分析，为明确NAA的病理意义进行积极的探索.
1材料和方法
1.1材料AK auto Ab 重链转基因小鼠由本室李巍博士建立〔5〕，在本校动物中心常规条件下饲养. 主要仪器包括全自动生化仪(COBAS INTEGRA 400)，血球分析仪(Medonic CA620?VET).
1.2方法对照观察了37对小鼠的生存时间，23对小鼠的体质量、脏器体质量比. 分析了18对小鼠的血常规及血生化改变：取尾静脉血25 μL，稀释液（含抗凝剂）稀释500倍后全自动血球分析仪检测血常规，总共20项指标；摘除小鼠眼球取血，分离血清，全自动生化分析仪检测总蛋白、白蛋白、血糖、血尿素氮、血肌酐共5项.
统计学处理：用SPSS13.0统计软件分别对计量资料和计数资料进行配对t 检验，Kaplan?Meier法绘制生存曲线，Log rank检验进行生存率比较. P0.05即认为差异具有统计学意义.
2结果
本研究在前期工作中获得了3系具有较高血清AK auto Ab滴度的转基因小鼠，每系均具有相似的表型，本文展示的是39系小鼠的表型改变.
2.1一般情况及体质量在20 wk前，转基因小鼠与同窝对照小鼠无明显差别. 20 wk左右以后，转基因小鼠逐渐出现病态表现：明显消瘦，弓背畸形，摄食减少，体毛皱褶，活动能力差（图1）. 转基因小鼠体质量减轻，与同窝对照小鼠相比具有统计学意义(P0.001). 15对雌性小鼠中转基因小鼠体质量(17.24±2.79) g，对照小鼠为(24.64±3.95) g，8对雄性小鼠中转基因小鼠体质量(19.61±1.83) g，对照小鼠为(24.95±4.79) g，雌性小鼠的体质量减轻比比雄性更加明显.
Tg：转基因小鼠；WT：同窝对照小鼠.
图1转基因小鼠与同窝对照小鼠的大体图片（略）
Tg：转基因小鼠；WT：同窝对照小鼠.
图2转基因小鼠与同窝对照小鼠的脾脏比较（略）
2.2脏器质量与体质量比转基因小鼠的脾脏明显增大(图2)，脾脏、肝脏、肾脏与体质量比增加且有统计学意义（n=23, t值分别为2.36, 2.62, 2.40，P均0.05，图3）.
2.3生存率与同窝对照小鼠相比，转基因小鼠生存曲线较低，生存时间缩短，Log rank检验显示生存率差异有统计学意义(n=37, P0.05, 图4）.
图3转基因小鼠与同窝对照小鼠脏器与体质量比（略）
图4生存曲线（Kaplan?Meier法绘制）（略）
2.4血常规转基因小鼠血小板（PLT）计数升高(t=2.71)，淋巴细胞（LYMF）绝对值降低(t=6.86)，白细胞（WBC）总数降低(t=5.20)，中性粒细胞（GPR）百分比升高(t=5.25)，血小板压积（PCT）增大(t=2.69,表1).
2.5血清生化转基因小鼠总蛋白(TP)升高(t=3.56)，尿素氮(BUN)升高(t=2.58)，血糖(GLU)降低(t=4.91)；而血肌酐(CRE)和白蛋白(ALB)无统计学意义(表2).