健肾颗粒剂对糖尿病肾病大鼠肾脏组织TGF?β1、ET?1mRNA及肾功能的影响(一)

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作者：徐丽梅 马建伟 马新英 魏汉林 董静 张文龙 蔡庆

【摘要】 〔目的〕观察中药健肾颗粒剂对DN大鼠肾脏组织中TGF?β1、ET?1 mRNA及肾功能影响。〔方法〕采用5/6肾切除加尾静脉注射STZ的方法复制大鼠DN动物模型，并随机分成健肾颗粒剂、苯拉普利、保肾康、病理对照及正常对照组，采用生化法检测肾功能， PCR 方法检测肾脏组织中TGF?β1 、ET?1 mRNA，组织病理学方法观察肾脏组织结构。〔结果〕健肾颗粒剂组大鼠血中Cr、BUN水平低于苯拉普利、保肾康及病理对照组（P0.05或P0.01）；健肾颗粒剂组肾脏组织中TGF?β1 、ET?1 mRNA表达明显低于其他三组（P0.05或P0.01），肾脏组织病理结构也较其他三组有明显改善；健肾颗粒剂降低DN大鼠血糖、尿蛋白及血脂的作用明显优于苯拉普利、保肾康及病理对照组（P0.05或P0.01）。〔结论〕健肾颗粒剂可明显改善DN大鼠肾功能，并有降血糖、调整血脂，下调DN大鼠肾脏TGF?β1、 ET?1mRNA的作用。

【关键词】 糖尿病肾病； 健肾颗粒剂；转化生长因子?β1； 内皮素?1

　　Abstract：〔Objective〕To explore the effects of TCM Jianshen Granule on kidney TGF?β1，ET?1mRNA and function of rats.〔Method〕Take 5/6 kidney resection and tail vein injection of STZ to copy rats DN model，and randomly divide them into groups of Jianshen Granule（1）Benazeprilat（2），Baoshen Kang（3），pathological control（4）and normal control（5），take bio?chemistry method to observe kidney tissue.〔Result〕The TGF?β1 and ET?1 mRNA expression in group 1 is markedly lower than other 3 groups，so is its kidney pathological structure much relieved；Jianshen Granule is much better than Benazeprilat，Baoshen Kang and group 4 on reducing glucose，urinary protein and lipid.〔Conclusion〕Jianshen Granule can obviously improve DN rats’ kidney function，also reduce glucose，regulate lipid，down?regulate TGF?β1 and ET?1mRNA as well.

　　Key words：DN；Jianshen Granule；TGF?β1；ET?1

糖尿病肾病是糖尿病的严重并发症之一，是导致死亡的重要原因，但目前治疗上尚缺乏理想的方法。我们在健肾冲剂治疗慢性肾衰的基础上，为进一步探讨其对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的作用，将其改进为无糖型颗粒剂，并观察了该方对DN大鼠肾功能、肾脏组织结构及肾脏TGF?β1、 ET?1mRNA的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　实验动物：雄性Wistar大鼠50只，体重190～220g，购于军事医学科学院动物实验中心。实验药物及试剂 健肾颗粒剂（主要药物为黄芪、山萸肉、山药、茯苓、当归、莪术等，由本院制剂中心制成无糖型颗粒剂），每袋5g。保肾康片，成都亨达制药厂生产，批号980605；苯拉普利，瑞士诺华制药有限公司制造，批号011400。链尿佐菌素（STZ）为美国Sigma公司产品。总RNA提取试剂盒由美国Gibco?BRL公司提供，反转录PCR试剂盒由Promega公司提供，TGF?β1、GAPDH引物由军事医学科学院提供。

　　1.2 方法

　　1.2.1 DN模型制作及动物分组

　　40只大鼠常规麻醉，消毒后，腹部正中纵切口，暴露肾脏，剥离肾包膜，右肾结扎切除，左肾切除上下极后，明胶海棉止血，关闭腹腔，1周后每只大鼠按40 mg/kg体重尾静脉注射STZ（用0.1mmol／L pH4.5的枸橼酸酸缓冲液，将STZ配成2%的溶液，4 ℃冰箱保存，新鲜配制）。72h后测定空腹血糖＞16mmol／L，尿糖呈强阳性，尿量超过正常组50%的大鼠为DN实验动物，给予高蛋白、高脂肪饲料喂养。然后将40只大鼠随机分成4组，每组10只。健肾颗粒剂组，每天按4g/kg给药；保肾康组，每天按34mg/kg给药；苯拉普利组，每天按3.4 mg/kg给药；病理对照组，每天予2 ml蒸馏水，灌饲。另设1组10只正常大鼠同时饲养作为空白对照。5组大鼠均喂养12周。标本采集 于12周在代谢笼内收集每只大鼠24 h尿， 12周末常规麻醉，腹腔静脉取血，并取残肾留做病理及相关检查。

　　1.2.2 观察指标及方法

　　（1）生化检测：血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、血糖（Glu）。（2）大鼠肾组织TGF?β1、 ET?1 mRNA测定采用半定量反转录聚合酶链反应（Reverse transcription?polymerase chain reaction，RT?PCR）技术。（3）24 h尿蛋白测定：采用双缩尿法。（4）肾脏组织病理学观察：采用HE、PAS染色，光镜下观察。电镜观察：取肾皮质削成1.0 mm3小块组织数块，用2.5%戊二醛前固定，1%饿酸后固定，梯度乙醇脱水，环氧树脂Epon812包埋，超薄切片（厚度80 nm），醋酸铀与枸橼酸铅双重染色，于电镜（PHILIPS CM 100）下观察。

　　1.2.3 统计学处理

　　数据描述以均数±标准差（x±s）表示。数据推断采用SPSS 13.0软件包统计，采用t检验、方差分析。