高效液相色谱法与薄层扫描法测定女贞子中齐墩果酸含量的比较(一)

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作者：罗朵生，郭姣，何伟，李勇

【摘要】 　　目的　研究用高效液相色谱测定女贞子中齐墩果酸含量的方法,并与薄层扫描色谱法比较。方法色谱柱为kromasil C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；柱温30℃； 流动相甲醇-水（85∶15）；流速0.7 ml・min-1；检测波长为204 nm。结果齐墩果酸在0.645 6～4.304 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9（n=5）,平均回收率为101.8%，RSD=0.75%。结论高效液相色谱法比薄层扫描色谱法更灵敏、简便、准确，精密度好。

【关键词】 高效液相色谱法 薄层扫描色谱法 女贞子 齐墩果酸

　　Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the content of oleanolic acid , and pare the results by HPLC and TLCS. MethodsWith a kromasil C18（5 μm，250 mm×4.6 mm） at 30℃,methyl alcohol -water(85∶15) was used as the mobile phase ,the flow rate was 0.7ml/min ,the wavelength was 204 nm.ResultsThe oleanolic acid had a good linear relationship with HPLC in the range of 0.645 6～4.304μg , r=0.999 9. The average recovery was 101.8%and RSD was 0.75%.ConclusionIt is proved that the HPLC is more reliable , simple, aurate and reproducible than TLCS is.

　　Key words：HPLC ; TLCS; Oleanolic acid； parison

　　女贞子系木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实，主要成分为齐墩果酸、熊果酸、乙酰齐墩果酸、女贞子苷等〔1〕。具有补肝肾阴、乌须明目的功能。《中国药典》2005年版Ⅰ部只对女贞子中的齐墩果酸采用薄层色谱法进行定量控制〔2〕，但因女贞子中同时还含有熊果酸，为齐墩果酸的同分异构体，化学结构与性质极为相似，以薄层色谱扫描法定量时，齐墩果酸与熊果酸两者无法分离导致含量测定不确。本文对高效液相色谱法与薄层色谱法测定女贞子中齐墩果酸含量进行了比较。现将结果报道如下。

　　1 仪器与试剂

　　WATERS 2695/2996型高效液相色谱仪（美国）；CAMAG TLC SCANNER3薄层色谱扫描仪（瑞士CAMAG）；UV-754型分光光度计（上海精密科学仪器公司）；ZF－2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；齐墩果酸（110790－200304购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；女贞子药材（购自广州致信中药饮片有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯，纯净水，其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 高效液相色谱法

　　2.1.1 对照品溶液的制备

　　精密称取齐墩果酸对照品10.76 mg，加甲醇溶解，制成每毫升含0.538 mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.1.2 供试品溶液的制备

　　取女贞子粗粉约0.5 g（批号200510170），精密称定，加乙醇25 ml，加热回流30 min，放冷，滤过，药渣加乙醇同上重复回流两次，合并滤液，蒸干，残渣加无水乙醇微热使溶解并转移至10 ml量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

　　2.1.3 最大吸收波长的选择

　　吸取齐墩果酸对照品溶液（0.538 mg・ml-1）1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用紫外可见分光光度计，从200～400 nm全波长扫描，齐墩果酸最大吸收波长为204 nm。见图1。

　　2.1.4 色谱条件与系统适用性实验

　　色谱柱为kromasil C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相为甲醇-水（85∶15）；检测波长为204 nm；流速0.7 ml・min-1；柱温：30℃。自动进样器进样。在此色谱条件下，得色谱图见图2～3。峰形对称，理论板数以齐墩果酸峰计在3 000以上。

　　2.1.5 线性关系的考察

　　吸取对照品溶液1，2，5，10，15 μl，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果酸微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，求得直线方程为Y=1 006 577.61X－58 700.91，r= 0.999 9。线性范围为0.645 6～4.304 μg。