败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治疗作用(一)

详细内容

【关键词】 败酱

　　摘要：目的：研究败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎的治疗作用，并初步探讨其作用机制。方法：采用混合菌液注入划伤的子宫内造成大鼠慢性盆腔炎，将60只雌性 Wistar大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药组和败酱复方高、中、低剂量组，每组10只，造模后2d开始ig给药，连续21 d。检测血液流变学、免疫学指标及病理学形态。结果：模型组大鼠全血粘度、血浆粘度和红细胞压积显著升高，脾淋巴细胞转化指数、血清IL2降低，IL6升高；败酱复方(ig,1.5、30、60g?kg-1?d-1)可不同程度改善上述指标；组织形态学观察发现败酱复方给药组大鼠慢性盆腔炎病理改变明显减轻。结论：败酱复方对混合菌液所致大鼠慢性盆腔炎有显著的治疗作用，其作用机制可能与改善血液循环和调节免疫功能有关。

　　关键词：败酱复方；慢性盆腔炎；血液流变学；免疫学；病理形态学
　　慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease, CPID)是妇科常见多发病，目前西医疗法以抗生素和皮质激素为主，对于改善症状有一定的疗效，但有许多不良反应，且很难消除病因〔1〕。中医常采用活血化瘀、清热利湿、温经散寒和理气止痛等方法，往往有较好的疗效。败酱复方是结合中医理论研制的复方中药制剂，多年临床实践表明，该药对诊断明确的慢性盆腔炎患者有较好的疗效，但作用机制尚不明确。本实验采用混合菌液致大鼠慢性盆腔炎模型，观察该复方对慢性盆腔炎的治疗作用，并对其作用机制进行了探讨。

　　1 实验材料

　　11 动物和仪器

　　雌性Wistar大鼠60只，8周龄，体重200±20g，由武汉大学医学院动物实验中心提供，动物许可证号SYXK(鄂)2004004。Stat Fax2100酶联免疫检测仪为美国Awareness公司产品，YDAIV(A)型全自动血液粘度仪为北京宏润达公司产品，超净工作台为苏州净化公司产品。

　　12 药品、试剂及菌种

　　败酱复方由败酱草、连翘、苦参、赤芍、黄柏、丹参、蒲公英和甘草等组成，上述药物由中国科学院武汉植物研究所江明喜研究员鉴定。用适量冷水浸泡30分钟，武火急煎10分钟，再用文火慢煎20分钟即可，由武汉大学药物非临床研究中心制备。妇科千金片，规格为032g/片，含生药34g/片，湖南株洲制药厂生产，批号200407077。高效植物凝集素(PHA)为暨南大学暨东生物工程研究所产品；IL2、IL6试剂盒由深圳晶美生物试剂有限公司提供；四甲基偶氮唑盐(MTT)购自Sigma公司；RPMI1640培养液和小牛血清购自GIBCO公司。菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌由武汉大学中南医院检验科临床分离并保种，以2∶1∶1的比例溶于无菌生理盐水配成浓度为3×109 ml-1的混合细菌悬液。

　　2 结果

　　21 模型的建立〔2〕

　　用03%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(50mg?kg-1)，无菌条件下于大鼠下腹部正中切口0.8~1cm，暴露并固定子宫，用注射器机械损伤子宫内膜组织，注入0.2ml混合细菌悬液至子宫双侧内，缝合切口，恢复饮水，正常清洁饲养。假手术组操作基本同模型组，但子宫内未注射混合菌液。

　　22 分组及给药

　　将60只大鼠随机分为6组，每组10只，于造模后2d开始ig给药，连续21天。败酱复方低、中、高剂量组分别ig败酱复方15、30、60g?kg-1?d-1；阳性药组ig妇科千金片2.8g?kg-1?d-1；假手术组及模型组ig等体积生理盐水，各组给药容积均为15ml?kg-1。

　　23 观察指标及测定方法

　　231 血液流变学指标

　　末次给药12小时后，各组大鼠麻醉后颈总动脉抽血测定全血粘度、血浆粘度和红细胞压积。

　　232 免疫学指标

　　① IL2和IL6测定

　　取大鼠肝素抗凝血，离心分离血浆，按试剂盒说明书采用双抗体夹心法测定IL2和IL6浓度。

　　②脾淋巴细胞转化指数测定

　　于给药30 d后，无菌条件下取脾，按文献〔3〕方法，用RPMI1640培养液制作单细胞悬液，并用TrisNH4Cl破坏红细胞，镜检活细胞数>90%后，调整细胞悬液浓度为2×106?L-1，将细胞加入16孔培养板中，每样品2孔，每孔1ml，其中一孔加入细胞周期分裂素(PHA，5mg?L-1)，另一孔作对照。置37℃，5%CO2培养箱中培养68h后，将细胞移入40孔培养板中，每孔加入细胞悬液100μl，并加入5%MTT溶液10μl，继续培养4h，每孔加100μl酸性异丙醇充分混匀，终止反应，用酶联免疫检测仪作比色测定，计算脾淋巴细胞转化指数(脾淋巴细胞转化指数=加PHA淋巴细胞OD值／未加PHA淋巴细胞OD值)。