“护肝灵”预防酒精性肝损伤与营养素数量变化的关系(一)

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【关键词】 护理；,,酒精性肝损伤；,,营养素；,,大鼠

　　摘要：目的观察“护肝灵”对酒精性肝损伤的影响。方法给大鼠连续口服乙醇42 d，取其股动脉血离心后测肝功能，取肝脏匀浆的测考乌斯亮兰蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素E。结果“护肝灵”低、中剂组均可提升考乌斯亮兰蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素E的含量。结论 “护肝灵”缓解酒精性肝损伤过程中营养素的消耗。

　　关键词：护理； 酒精性肝损伤； 营养素； 大鼠

　　乙醇只提供热量，不提供营养素，因此长期大量饮酒可导致营养素缺乏，而营养养素缺乏又成为酒精性肝损伤的致病因素。我们通过乙醇灌胃法复制酒精性肝损伤模型，来观察“护肝灵”抗酒精性肝损伤与营养素数量变化之间的关系。现报道如下。

　　1 材料

　　1.1 动物 同批繁殖Wistar大鼠50只，全♂，体质量180～220 g, 四川大学华西动物中心提供，合格证书号：医动字2401011号。

　　1.2 95%乙醇（ethanol，EtOH）（分析醇） 成都蜀都实业有限责任公司生产，批号：200251。

　　1.3 “护肝灵”胶囊 0.3 g/粒，相当于生药2.14 g/粒，四川天然药物研究所加工。

　　1.4 多烯磷脂酰胆碱（Polyenephosphatidylcholie,APSULES、商品名：易善复） 生产厂：A.Nattermann&Cie.Gmbh Koln，批号：H20020026。

　　1.5 肝匀浆介质pH 7.4，0.01 mol/L缓血酸氨（TrisHCl），0.0001 mol/L 乙二胺四乙酸钠（EDTA2Na），0.01 mol/L蔗糖,0.8%的氯化钠（NaCl）溶液,所用试剂在成都试剂厂购置。

　　1.6 考马斯亮兰蛋白（CBBG250蛋白）试剂盒 南京建成生物工程研究所生产，批号：20030916。

　　1.7 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)试剂盒 南京建成生物工程研究所生产，批号：20030917 。

　　1.8 维生素E（Vitamin E ,VE）试剂盒 南京建成生物工程研究所生产，批号： 20030918。

　　2 方法

　　2.1 动物分组造模及给药 常规饲养7 d后，称量体质量，按体质量大小分4层后随机分为正常对照组（简称正常组）、模型对照组（简称模型组）、“护肝灵”低剂量预防给药组（简称低剂量组）、“护肝灵”高剂量预防给药组（简称高剂量组）、易善复预防给药对照组（简称对照组），每组10只；除正常组外，其余各组用50%乙醇按12 ml/Kg造模；低剂量组、高剂量组同时分别予“护肝灵”(0.15 g?Kg1?d1)、(0.3 g?Kg1?d1)剂量的稀释液灌胃（予蒸馏水稀释，依次相当于人每次用量的5倍、10倍，人每日用量的2.5倍、5倍）；对照组予易善复（0.15 g?Kg1?d1）稀释液灌胃（予蒸馏水稀释）；造模与给药均连续42 d。

　　2.2 观察 造模及给药期间，各组均普食普水饲养，连续观察大鼠的活泼及自卫、饮食饮水、体毛皮表、死亡及其它（大小便、分泌物）等情况，并记录。

　　2.3 标本采集和制作 造模及药物干预结束后，禁食禁水12 h，称量体质量，取大鼠股动脉血2 ml，-196℃液氮保存携带，45℃温箱孵育、3 000 r/min离心，取上清液检测：甘油三酯（TG），白蛋白（ALB），球蛋白（GLOB），并计算A/G；剖开大鼠胸、腹腔，取肝、心、脾、肺、肾、睾丸等观察色泽改变情况，并用电子天平称量各脏器质量，计算脏器系数；取大鼠肝脏胸侧叶下第二层的三叶中的右侧叶肝脏作标本, -196℃液氮保存携带、-60℃保存,肝标本用0.86%冷生理盐水洗涤，滤纸吸干水份，准确称重，移取9倍肝重冷匀浆介质的1/3到匀浆玻璃管中，剪碎，约12 000 r/min冰水中间隙匀浆4次，吸出到离心管，其余冷匀浆介质2/3洗涤匀浆玻璃管，移到前述离心管，3 000 r/min离心15 min，取上清液，制成10%的肝匀浆储备液，按试剂盒说明书检查CBBG250蛋白、GSHPx、VE。

　　2.4 统计学方法使用PEMS3.1统计软件处理数据，所有计量资料用(±s)表示，组间比较用 t检验(方差齐时)或秩和检验(方差不齐时)。P＜0.05为有统计学意义。

　　3 结果

　　3.1 活泼及自卫、体毛光顺、饮水饲食、死亡等情况 在整个实验过程中，正常组大鼠活泼、自卫意识强烈、体毛光顺、饮水饲食正常、无死亡。其余各组大鼠活泼、自卫意识均有降低，尤其以模型组为甚，交替出现烦躁、嗜睡、明显疲软状态；体毛光顺程度下降，表现为毛逆、成团、欠光泽；饮水饲食能力略有下降；在整个实验过程中，高剂量第3只大鼠死亡、对照组第4只大鼠死亡，死亡原因为咬打，大体解剖无异常发现。

　　3.2 大鼠体质量、内脏质量及脏器系数等情况 体质量、内脏质量、睾丸质量等结果见表1。各组间体质量、心脏质量、肺脏质量、肾脏质量、睾丸质量等相互比较，差异均无显著性（P＞0.05）；模型组大鼠肝脏质量、脾脏质量均较正常组明显升高（P＜0.05）；“护肝灵”高剂量和低剂量的大鼠肝脏质量、脾脏质量均低于模型组，差异有显著性（P＜0.05）。

　　3.3 大鼠血中TG，ALB，GLOB及A/G测定结果 见表3。各组间TG，ALB，GLOB及A/G相互比较，差异均无显著性（P＞0.05）。

　　3.4 大鼠肝组织匀浆检测CBBG250蛋白，GSHPx，VE含量 结果见表4。模型组大鼠肝匀浆中CBBG250蛋白，GSHPx，VE的含量较正常组明显降低，差异有显著性（P＜0.05）；“护肝灵”高剂量组和低剂量组肝组织匀浆中CBBG250蛋白，GSHPx含量均较模型组明显升高，差异有显著性（P＜0.05）；“护肝灵”低剂量组肝组织匀浆中V-E的含量较模型组明显升高，差异有显著性（P＜0.05），“护肝灵”高剂量组肝组织匀浆中V-E的含量较模型组有升高趋势，差异无显著性（P＞0.05）。

　　表1 大鼠体质量、内脏质量、睾丸质量等结果（略）

　　与正常组比较 *P＜0.05; 与模型组比较 #P＜0.05脏器系数（脏器质量/体质量×100%）结果见表2 。各组间心脏、肺脏、肾脏、睾丸等的脏器系数相互比较，差异均无显著性（P＞0.05）；模型组大鼠肝脏、脾脏的脏器系数均较正常组明显升高（P＜0.05）；“护肝灵”高剂量和低剂量的大鼠脾脏的脏器系数均低于模型组，差异有显著性（P＜0.05）。