厚朴饮片不同加工工艺的比较研究(一)

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作者：刘元慧 王晓明 王德兴 袁珂

【摘要】 目的比较厚朴饮片的不同加工工艺。方法采用高效液相色谱法，以厚朴酚、和厚朴酚的含量为考察指标，通过正交实验比较姜制厚朴的不同炮制工艺。结果姜炒法的最佳工艺为A1B2C2，即用10%的姜汁闷润2 h在120℃下炒干；姜蒸法的最佳工艺为A2B2C2， 即用10％的姜汁闷润2 h后再蒸制3 h，蒸制温度100℃。结论两种工艺方法相比，姜炒法制得的厚朴饮片有效成分的保留量相对较高。该研究为制定厚朴饮片合理、规范的加工工艺及质量标准提供了参考依据。

【关键词】 厚朴 炮制工艺 正交实验 厚朴酚 和厚朴酚 高效液相色谱法

　　厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.var. biloba Rehd. et Wils.的干燥干皮、枝皮或根皮〔1〕。厚朴属重要的传统中药，具有抗菌、消炎、抗胃溃疡、抗氧化等作用〔2〕。厚朴中的主要成分厚朴酚与和厚朴酚为联苯型木脂素类〔3〕，以游离态与植物胶、树脂等脂溶性成分共存。厚朴的炮制方法很多，历代炮制方法就有十余种〔4〕， 姜制为常用炮制方法， 但工艺尚不统一，导致质量差异较大〔5，6〕。本研究根据《中国药典》2005 版Ⅰ部的规定，对姜制厚朴的最佳炮制工艺条件进行了初步探讨。利用L4(23)正交设计实验，采用高效液相色谱法，以厚朴酚、和厚朴酚的含量为考察指标，通过正交实验比较姜炒与姜蒸厚朴的不同炮制工艺，找出合理的炮制方法，以达到改进厚朴饮片炮制工艺的目的。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 515型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；Waters 2487双波长检测器（美国Waters 公司）；英谱2000HS工作站；KQ-250B超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）； Millipore Simplicity型超纯水器（美国Millipore公司）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；101-1型电热恒温干燥箱；微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士）。

厚朴药材于2007-04采自浙江丽水，经浙江林学院斯金平教授鉴定为木兰科凹叶厚朴，样品保存于本实验室；对照品厚朴酚（110729-200310）与和厚朴酚（110730-200307）购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，流动相均经0.45 μm微孔滤膜滤过。

2 方法和结果

2.1 色谱条件Symmetry C18色谱柱(3.9 mm×150 mm, 5 μm)，流动相为甲醇-水(78∶22)；流速1. 0 ml・ min-1；检测波长295 nm；柱温25℃；灵敏度0.2AUFS，理论塔板数大于3 000。

2.2 含量测定方法的建立

2.2.1 对照品及供试品溶液的制备 精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品加甲醇分别配成浓度为40.3 μg ・ ml-1和 6.04 μg ・ ml-1溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液。

2.2.2 线性关系考察 精密量取各对照品溶液，分别进样2,4,6,8,10 μl，按照“2.1”项下的色谱条件测定。以对照品质量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，计算厚朴酚的回归方程：Y = 2.56×10-8X-3.6×10-4, r = 0. 999 8；和厚朴酚的回归方程：Y = 2.83×10-8X+1.78×10-3， r =0. 999 8。结果表明厚朴酚在4.03～20.15 μg，和厚朴酚在0.604～3.020 μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.3 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4 h进样10 μl，以峰面积值为指标计算RSD，考察供试品溶液的稳定性。结果厚朴酚、和厚朴酚的RSD分别为1.32%和2.08% 。表明供试品溶液在4 h内稳定。

2.2.4 精密度实验 分别取对照品溶液，精密进样10 μl，连续进样5次，测定峰面积。结果厚朴酚、和厚朴酚的RSD分别为1.48%和1.69%。表明仪器精密度良好。

2.2.5 样品测定 将厚朴生品置40 ℃烘箱中干燥至恒重，粉碎成粗粉。精密称取待测样品18份，每份约20.0 g，按正交实验表中所选取的因素水平分别进行加工炮制。将炮制后的饮片与炮制前的生品分别置50 ℃烘箱中干燥至恒重，粉碎过100目筛。精密称取待测样品约3.0 g，按照“2.2.1” 项下供试品溶液的制备方法制备并进样10 μl，记录峰面积，计算厚朴酚与和厚朴酚的含量。对照品及样品的色谱图见图1。

a-厚朴酚对照品 b-和厚朴酚对照品 c-厚朴姜炒品 d-厚朴姜蒸品