肾络瘀阻证患者肾间质中α?SMA的表达及意义(一)

详细内容

作者：杨东, 杜永平, 沈青, 陈威, 于艳, 陈光磊

【摘要】 　　目的：研究α平滑肌肌动蛋白（alpha?smooth muscle actin, α?SMA）在肾络瘀阻证患者肾小管间质中的表达特征。方法：采用免疫组织化学法检测54例肾络瘀阻证患者肾穿刺标本中间质α?SMA的表达。结果：肾络瘀阻的程度与肾间质纤维化程度呈正相关（P＜0.01），并与间质中α?SMA的表达呈正相关（P＜0.01）。结论：肾络瘀阻是中医认识肾纤维化的病理本质之一，随着血瘀程度的加重，肾间质中肌成纤维细胞大量增殖，是导致肾间质纤维化的重要原因。

【关键词】 肾病　纤维化 α肌动蛋白 成纤维细胞

　　Conclusion: Kidney collateral stasis is one of the main reasons of renal fibrosis. With the increasing of kidney collateral stasis, MFBs in the renal interstitium proliferate obviously, being one of the most important causes of renal interstitial fibrosis.

　　Keywords: nephrosis; fibrosis; alpha actin; fibroblasts

　　肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）是指由多种原因引起的细胞外基质（extracellular matrix, ECM）成分在肾间质过度沉积，它几乎是各种肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础〔1〕。因此，拮抗肾纤维化，延缓肾衰竭的发生、发展，一直是研究的重要方向。现代研究证实，多种因素参与肾间质纤维化的过程，其中肌成纤维细胞（myofibroblast, MFB）是引发肾间质纤维化的一个重要因素。

　　祖国传统医学认为瘀血是肾间质纤维化的基本病机之一，贯穿疾病始终，活血化瘀法（补脾肾活血化瘀法、活血化瘀解毒法、活血化瘀养血生血法等）可用于慢性肾间质纤维化全过程的治疗。因此，我们通过检测MFB的标志蛋白α平滑肌肌动蛋白（alpha?smooth muscle actin, α?SMA）在患者肾活检标本的表达，研究肾络瘀阻证与MFB之间的关系以探讨肾间质纤维化的发生机制，并为活血通络治疗提供实验依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 选择第四军医大学西京医院2006年9月至2007年3月肾内科做肾活检的住院患者54例为研究对象，其中男26例，女28例。临床诊断为免疫球蛋白A（immunoglobulin A, IgA）肾病16例，IgM肾病3例，狼疮性肾炎6例，紫癜性肾炎7例，肾病综合征9例，间质性肾炎2例，糖尿病肾病4例，隐匿性肾炎2例，乙肝相关肾病3例，高血压肾病2例。所选患者均有不同程度的肾间质纤维化，并且按照其纤维化程度分为轻度、中度和重度组。计算各组每位患者的血瘀指数。

　　1.2 肾间质纤维化的评价 肾活检组织经中性缓冲液福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片3 μm进行Masson三色染色。在MPIAS?500彩色病理分析系统下计算肾间质纤维化指数：高倍镜（×200）下随机选10个不重叠视野，测定间质纤维化面积占同视野小管间质总面积的百分比。积分如下：无病变为0分；小于25％为1分，25%～50％为2分，大于50％为3分。每张切片取10个视野平均积分，再在各组内取平均值。

　　1.3 血瘀指数计算 所有病人均参考血瘀证诊断标准〔2〕，将肾络瘀阻证有关临床表现列为10项：（1）面色黧黑或晦暗；（2）腰痛固定，隐痛或刺痛；（3）肌肤甲错或肢体麻木或爪甲青紫；（4）舌色紫暗或有瘀点、瘀斑，舌下筋系瘀紫；（5）脉象细涩；（6）血纤维蛋白原含量增高；（7）B超示肾脏内血流压力改变；（8）血液流变学检测全血黏度或血浆黏度升高；（9）鼻衄及齿衄；（10）血尿。每项1分，计算总积分，每位患者所得总分作为血瘀指数来判断血瘀程度，≥3分诊断为肾络瘀阻证，其中以有无血尿以及血纤维蛋白原含量是否增高作为主要诊断依据。

　　1.4 免疫组化检测 小鼠抗人α?SMA单克隆抗体购于武汉博士德公司。兔抗小鼠免疫组化SP即用型试剂盒购于北京中山公司。石蜡切片厚3 μm，二甲苯脱腊，梯度酒精依次脱水，0.3％ H2O2室温孵育30 min，蒸馏水冲洗，10％山羊血清封闭37 ℃ 1 h，按1∶150比例加入一抗4 ℃过夜，37 ℃复温1 h，多聚?L?赖氨酸和磷酸盐缓冲液（PBS）洗5 min×3次，加入二抗37 ℃ 1 h，PBS洗5 min×3次，3,3?二氨基联苯胺盐酸盐（3,3?diaminobenzidine, DAB）显色5～10 min，水冲洗，复染，脱水透明后封片，镜检。以PBS代替一抗作为阴性对照。

　　每份标本分别选取5个低倍镜（×10）视野，采用免疫组化分析软件（HPIAS?1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统）进行免疫组化阳性表达分析，对选取视野内α?SMA免疫组化阳性信号进行图像分析，计算小管间质免疫组化检测阳性面积和小管间质总面积的比值，取5个比值的平均值作为每例患者肾小管间质区域α?SMA的阳性率（％）。

　　1.5 血液检测指标 患者入院时检测血液流变学、血纤维蛋白原、血肌酐、血尿素氮等指标。

　　1.6 统计学方法 应用SPSS 11.0对数据进行统计学分析，数值以x±s表示，采用单因素方差分析以及直线相关分析方法。