峨眉野连不同部位总生物碱和盐酸小檗碱的含量测定(一)

详细内容

作者：周嘉裕， 廖海， 彭书明， 陈放

【关键词】 峨眉野生黄连；,,紫外分光光度法；,,高效液相色谱；,,组织培养

　　摘要：目的确定峨眉野连不同器官的总生物碱和小檗碱含量。方法采用紫外分光光度法测定总生物碱含量，高效液相色谱方法测定盐酸小檗碱含量。结果峨眉野连根茎、须根、叶片和叶柄中，均含有生物碱和小檗碱。结论 野连地上器官含有较高的总生物碱和小檗碱，对濒危植物的组织培养及保护提供理论指导。

　　关键词：峨眉野生黄连； 紫外分光光度法； 高效液相色谱； 组织培养

　　Determination of Total Alkaloid and Berberine Contents in Different ans from Coptis omeiensis

　　Abstract：ObjectiveTo determine the total alkaloid and berberine contents in rhizome, fibre, lamina and petiole ans from Coptis omeiensis. MethodsThe total alkaloid and berberine contents were determined by UV and HPLC methods respectively. ResultsRhizome, fibre, lamina and petiole ans obtain alkaloid and berberine contents. ConclusionThe paratively high contents in total alkaloid and berberine in the overground ans of Coptis omeiensis may provide guidance for tissue culture and resource protection.

　　Key words：Coptis omeiensis; UV; HPLC; Tissue culture

　　黄连为重要的中药材，味苦性寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。小檗碱为其主要有效成分。与不同品种和产地黄连比较，峨眉野连Coptis omeiensis C. Y. Cheng的总生物碱和小檗碱含量较高，药性位居上品〔1~3〕。由于峨眉野连生态环境较为特殊，加之过度的采挖，致使尚未解决家种栽培问题的野连种群数量急剧减少，已处于濒临灭绝的边缘〔4，5〕。因此笔者认为开展组织培养和人工培育等技术对峨眉野连进行保护已迫在眉睫。测定黄连不同器官的生物碱含量，对组织培养时有选择地诱导根、茎、叶等器官具有指导意义。本实验利用紫外分光光度法和高效液相色谱（HPLC）方法对峨眉野连的根茎、叶片、须根和叶柄的总生物碱和小檗碱含量进行了分析。结果报道如下。

　　1 仪器与材料

　　Waters515型高效液相色谱系统：Waters2487检测器，WDL95色谱工作站；FA1004电子天平（上海天平）；Millipore超纯水制备器和0.45 μm滤膜；SB2200超声波；TU1800紫外可见分光光度（北京普析）；峨眉野生黄连Coptis omeiensisC. Y. Cheng采集于峨眉山，采期为200410中旬~11月上旬，以根茎上节结数推算单株年龄；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号0732200005）；乙腈为色谱纯；其余试剂均为国产分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 总生物碱的含量测定参照文献〔1〕，采用紫外分光光度法测定。

　　2.1.1 标准曲线制备精取不同量盐酸小檗碱标准液（1 mg/ml），加甲醇盐酸（100∶1）稀释至刻度。以甲醇盐酸（100∶1）液为空白对照，于345 nm处测定光吸收值。以光吸收值Y对待测定小檗碱量X（μg）进行线性回归，其回归方程为：Y＝0.062 4X+0.091，相关系数r＝0.999 3。

　　2.1.2 总生物碱含量测定精取样液适量，加甲醇盐酸（100∶1）稀释至刻度。以甲醇盐酸（100∶1）液为空白对照，于345 nm处测定光吸收值。计算出相应的总生物碱含量。结果见表1。

　　表1 峨眉黄连营养器官总生物碱和盐酸小檗碱含量(略)

　　B为小檗碱，T为总碱

　　2.2 盐酸小檗碱含量测定

　　2.2.1 色谱条件色谱柱：CBL C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈50 mM磷酸二氢钾（50∶50），磷酸调流动相pH至4.7，内含25mM十二烷基硫酸钠（SDS）；流速：1.0 ml/min；检测波长345 nm；柱温：35℃。以盐酸小檗碱色谱峰计算，保留时间为22.10 min，理论塔板数不低于3 000。