赤芝子实体的化学成分研究(一)
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作者：陈曼 张敉 张涵庆 孙视
【摘要】 目的研究赤芝子实体的化学成分。方法应用多种色谱方法进行分离和纯化, 通过1H，13C-NMR 和MS 等波谱技术确定化合物的结构。结果从赤芝子实体中分离得到8个化合物, 分别被鉴定为:灵芝醇B(ganoderiol B，1)、灵芝酸A (ganoderic acid A,2 )、赤芝酸A（lucidenic acid A,3）、灵芝萜酮二醇（ganodermanondiol，4）、 3，7，11，15，23-5O-5α-羊毛甾-8-烯-26烷酸（3，7，11，15，23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26- oic acid，5）、麦角甾-7, 22-二烯-3β-醇十五烷酸酯(ergosta-7, 22-dien-3β-ol- pentadecanoate, 6 )、麦角甾-7, 22-二烯-3β-醇(ergost a-7，22-dien-3β-ol，7)及正二十六烷酸（n-hexacosanoic acid，8）。结论其中化合物8为从该植物中首次分离得到。
【关键词】 赤芝；子实体；三萜类；二十六烷酸
Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of fruiting bodies of Ganoderm lucidum..MethodsVarious kinds of chromatography methods were used to separate the chemical constituents from the fruiting bodies of G. lucidum. Their structures were determined by 1H,13C-NMR and Mass spectral data.ResultsEight pounds were isolated from the fruiting bodies of G. lucidum and characterized as ganoderiol B（1） , ganoderic acid A（2 )，lucidenic acid A （3），ganodermanondiol（4）， 3，7，11，15，23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26- oic acid （5）， ergosta-7, 22-dien-3β-ol-pentadecanoate（ 6 )，ergosta-7，22-dien-3β-ol（7) and n-hexacosanoic acid（8）.Conclusionpound 8 was isolated from G. lucidum for the first time.
Key words：Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.)
Karst.; Fruiting body; Triterpenoids；N-hexacosanoic acid
赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst. 为担子菌纲多孔菌科灵芝属植物〔1〕，与紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang均首次收录于《中国药典》2000年版〔2〕，作为灵芝的药用正品。灵芝在我国已有悠久的应用历史，东汉时期的《神农本草经》已把灵芝列为上品，认为灵芝能防治多种疾病，是滋补强壮、扶正固本的珍品。为了从中分离出具有抗肿瘤活性的成分，我们对该植物进行了提取分离，并对分得的单体进行了分离纯化和结构鉴定。本文报道从其中分离并鉴定出的8个化合物,它们分别为:灵芝醇B(ganoderiol B， 1)、灵芝酸A (ganoderic acid A,2 )、赤芝酸A（lucidenic A,3）、灵芝酮二醇（ganodermanondiol ，4）、 3，7，11，15，23-5O-5α-羊毛甾-8-烯-26烷酸（3，7，11，15，23-pentaoxo-5α-lanosta-8-en-26- oic acid，5）、麦角甾-7, 22-二烯-3β-醇十五烷酸酯(ergosta-7, 22-dien-3β- ol-pentadecanoate, 6 )、麦角甾-7, 22-二烯-3β-醇(ergosta-7，22-dien-3β-ol ，7)及正二十六烷酸（n-hexacosanoic acid)。
1 仪器与材料
熔点用X-5型显微熔点测定仪测定（未校正）；NMR谱用BRUKER Avance 300及BRUKER Avance 500型核磁共振仪测定； ESI-MS用HP 1100 HPLC/ESI液质联用仪测定； EI-MS用岛津MS7070E型质谱仪测定。
薄层色谱硅胶及柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；硅胶GF254薄层预制板为烟台化学工业研究所产品；所用试剂均为分析纯。
样品采自安徽省黄山市, 由中国科学院地理与湖泊研究所南京中科药业股份有限公司沈建高级工程师鉴定为赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst.，凭证标本存放于南京中科药业股份有限公司。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
赤芝子实体粗粉（干品）4 kg，用8倍量乙醇分别回流提取3次，2 h/次，提取液浓缩得浸膏，加适量水混悬稀释后，得到下层沉淀（Ⅰ）部分（33 g）和上层混悬液，上层混悬液依次用石油醚(60～90 ℃)、二氯甲烷、醋酸乙酯分别萃取, 合并萃取液，回收溶剂, 得到二氯甲烷（Ⅱ）萃取部分（63 g）。Ⅰ部分经硅胶柱层析，石油醚-醋酸乙酯（10∶0～0∶10)）梯度洗脱， 每份500 ml，分别浓缩，其中94～98份合并后经反复硅胶柱层析（石油醚-醋酸乙酯）和Sephadex LH-20纯化（甲醇），得到化合物5（23 mg），Ⅱ部分采用硅胶柱层析，石油醚-醋酸乙酯（10∶0～0∶10)）梯度洗脱，其中37～42部分、43～45部分、69～81部分、82～100部分、152～156部分及223～239部分分别经反复硅胶柱层析(石油醚-醋酸乙酯系统)及Sephadex LH-20纯化(氯仿-甲醇系统)，得到化合物1 (8.4 mg)、2 (120 mg)、3( 6.7 mg)、4(13 mg)、6(13 mg)、7 (36 mg) 和8(15mg)。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物1白色晶体，mp171～173℃，分子式C30H48O2。EI-MS m/z:440〔M〕+，相对分子质量440。Liebermann-Burchard 反应阳性。1H-NMR（CDCl3,300 MHz） δ：5.47(1H，d，J=6.4Hz，C7-H)，5.40(1H，t，J=6.6Hz，C24-H)，5.31(1H，d，J=6.2Hz，C11-H)，4.00(2H，s，C26-H)，3.24(1H，dd，J=11.4，4．4 Hz，C3-H)，1．67(3H，s，C27- CH3)，1.01(3H，s，C28-CH3)，0.88(6H，s，C19和C30-CH3)，0．57(3H，s，C18-CH3)。13C-NMR（CDCl3 ,75MHz） δ：35.72(C-1）,28.10(C-2),78.97(C-3),38.68(C-4),50.31(C-5)，22.98(C-6),120.25(C-7),142.72(C-8),146.00(C-9),37.36(C-10),116.30(C-11),37.83(C-12),43.77(C-13),49.14(C-14),27.88(C-15),31.49(C-16),50.92(C-17),15.73(C-18),22.70（C-19),36.05(C-20),18.37(C-21),35.91(C-22),24.51(C-23),127.03(C-24),134.39(C-25),69.08(C-26),13.58(C-27) ，25.53(C-28),27.88(C-29),15.73（C-30)。将化合物1的光谱数据与文献〔3，4〕对照，确定为灵芝醇B。
2.2.2 化合物2白色结晶，mp112～113℃，分子式：C30H44O7。 EI-MS m/z:516 〔M〕 +，相对分子质量516。Liebermann-Burchard 反应阳性。1H-NMR（CDCl3 ,500 MHz） δ：4.79(1H，m， C15-H)，4.62(1H，m，C7-H)，1.28(3H，s，C19-CH3),1.26(3H，s，C28-CH3), 1.12(3H，s，C27-CH3),1.10(3H，s，C29-CH3),0.98(3H，s，C18-CH3)， 0.90(3H，s，C21-CH3)。13C-NMR（CDCl3 , 125 MHz）δ：35.61(C-1),34.31(C-2),216.82(C-3),46.52(C-4),48.97(C-5)，29.01(C-6),68.98(C-7),159.01(C-8),140.41(C-9), 38.08(C-10),119.55(C-11),51.75(C-12),46.83(C-13),53.96(C-14),72.50(C-15),36.26(C-16),47.90(C-17),17.29(C-18),19.32（C-19）,32.62(C-20）19.53(C-21),49.60(C-22),208.5(C-23),46.68(C-24),34.62(C-25),179.98(C-26),16.92(C-27) ，19.72(C-28),27.26(C-29),20.75（C-30）。将化合物的波谱数据与文献〔5，6〕对照，完全一致，确定为灵芝酸A。
2.2.3 化合物3 白色针状结晶，mp294～295℃，分子式：C27H38O6。Liebermann-Burchard 反应阳性。EI-MS m/z：458〔M〕 + , 相对分子质量458。1H-NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ: 0.95, 1.06,1.08,1.21,1.30 (各3H ,s) ,0.93 (3H ,d ,J= 8.4 Hz) ,4.81 (1H ,t ,J= 7.8 Hz ,C7-H) 。13C-NMR(CDCl3 ,75 MHz) δ：30.59(C-1）,34.31(C-2),216.57(C-3),46.81(C-4),49.00(C-5)，27.71(C-6),66.39(C-7),157.88(C-8),141.33(C-9),38.32(C-10),197.68(C-11),50.28(C-12),45.01(C-13),59.38(C-14),217.90(C-15),41.11(C-16),46.39(C-17),17.73(C-18),18.18(C-19),35.20(C-20),18.04(C-21),30.50(C-22),35.71(C-23),177.52(C-24),27.03(C-25),20.81(C-26),24.70(C-27)。将化合物3的波谱数据与文献〔7，8〕对照,完全一致，确定为赤芝酸A。
2.2.4 化合物4白色针晶，mp182～183℃，分子式C30H48O3。Liebermann-Burchard 反应阳性,EI-MS m/z：456〔M〕 +，相对分子质量456。1H-NMR (CDCl3, 300 MHz ) δ: 5.40 (1H, d, C7-H) , 3.30（1H，dd，活泼氢质子），1.22(3H,s, C27-CH3)，1.13(3H, s, C26-CH3)，1.09(3H, s, C29-CH3)，0.59（(3H, s, C18-CH3)，0.91(3H, d，C21-CH3) 。13C-NMR（CDCl3,75 MHz）δ：35.55(C-1）,34.87(C-2),216.80(C-3),47.49(C-4),50.74(C-5)，23.69(C-6),119.95(C-7),142.88(C-8),144.54(C-9),37.22(C-10),117.27(C-11),37.85(C-12),43.78(C-13),50.32(C-14),31.48(C-15),27.88(C-16),50.99(C-17),15.74(C-18),22.07（C-19),36.64(C-20),18.65(C-21),33.49(C-22),28.74(C-23),79.61(C-24),73.24(C-25),23.23(C-26),26.59(C-27) ，25.46(C-28),25.37(C-29),22.48（C-30)。将化合物4的波谱数据与文献〔9，10〕对照,确定为灵芝萜酮二醇。