甲醛吸入对小鼠免疫系统毒性作用(一)

【摘要】 目的　通过吸入甲醛(formaldehyde，FA)染毒小鼠观察其免疫损伤作用。方法 选用健康清洁级昆明种小鼠30只，随机分成5组(即阴性对照组1，3，5?mg/m3染毒组和阳性对照组)，每组6只，用静式吸入染毒方式染毒14?d处死后，计算脾脏系数、胸腺系数；测定脾脏和胸腺CD3含量、CD4含量、CD8含量；测定巨噬细胞吞噬功能、迟发超敏反应、抗体生成细胞数及脾脏淋巴细胞功能转化。结果 甲醛吸入染毒可以引起小鼠脾脏系数、胸腺系数减小(P0?05或P0?01)；脾脏和胸腺CD3、CD4、CD8含量降低，CD4/CD8明显增大(P0.05或P0.01);脾淋巴细胞转化功能、迟发变态反应强度、抗体生成细胞数、巨噬细胞吞噬功能均随染毒剂量的升高而下降(P0.05或P0.01)。结论　吸入甲醛可导致小鼠免疫系统的全面损伤

【关键词】 甲醛；免疫损伤；免疫功能

　　近年来，随着社会发展和人民生活水平的不断提高，室内空气污染已成为一个公众所关注、迫切需要解决的卫生问题〔1〕。甲醛(Formaldehyde,FA)是造成室内空气污染的主要物质〔2〕，其对人体的健康危害不容忽视。目前，对甲醛造成的免疫损伤国内外研究较少。因此，本文从免疫病理、细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫等4个方面对甲醛的免疫毒性作用进行了研究，为建立甲醛免疫毒性的卫生标准提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1?1 主要试剂

　　甲醛，分析纯(上海溶剂厂)；注射用环磷酰胺(CP)(上海华联制药有限公司)；淋巴细胞分离液，Q/GHSB 85-2001(上海恒信化学试剂有限公司)；3-氨丙基三乙氧硅烷(APES)，32K1265(武汉博士德生物工程有限公司);兔抗鼠CD3、CD4、CD8单克隆抗体，即用型RSC7219K(天津灏洋生物工程有限责任公司);浓缩型二氨基联苯胺显色(DAB)试剂盒(天津灏洋生物工程有限责任公司);刀豆蛋白A(ConA)、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)试剂盒(北京夏斯生物技术有限公司)。

　　1?2　仪器及设备

　　50?L静式染毒柜；GS-3交直流两用大气采样仪；VIS-7220分光光度计：PRECISA 300MC电子天平；SHZ-22水浴恒温振荡器；光学显微镜，BH-2(日本OLYMPUS公司)；QL-901旋涡混合器等。

　　1?3 实验方法

　　采用健康昆明种纯系小鼠30只，鼠龄7周，体重18～22?g(山西医科大学动物中心)。将动物随机分为5组(即阴性对照组，1，3，5?mg/m3染毒组和阳性对照组)，每组6只，雌雄各半。采用甲醛静式吸入染毒，每天染毒2?h，连续染毒14?d。阴性对照组吸入过滤的新鲜空气，处理时间与染毒组相同。阳性对照组从第8?d开始，每日按40?mg/(kg・bw)(用生理盐水配制)腹腔注射环磷酰胺(CP)，连续7?d。染毒结束次日称重小鼠后，颈椎脱臼处死，无菌取脾脏、胸腺，除去血液，滤纸吸干，称重。

　　1?4 免疫指标测定

　　(1)计算脾脏(胸腺)系数：脾脏(胸腺)系数=器官重量(mg)/体重(g)；(2)脾脏和胸腺CD3含量、CD4含量、CD8含量测定：将取出的小鼠脾脏、胸腺按文献〔3〕方法制备成浓度为1×106的细胞悬液，再取其50?μl滴于经APES处理过的载玻片上，制成淋巴细胞涂片，之后分别按试剂盒说明书对脾脏、胸腺CD3、CD4、CD8含量进行测定，计算阳性细胞率；(3)脾脏淋巴细胞功能转化测定：采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法〔4〕； (4)迟发型超敏反应测定：采用足垫增厚法〔5〕；(5)抗体生成细胞数测定：采用溶血空斑试验(PFC试验)〔6〕；(6)巨噬细胞吞噬功功能测定：采用鸡红细胞吞噬实验〔7〕。

　　1?5 统计分析

　　采用SPSS?10?0统计软件进行方差齐性检验、方差分析、相关分析。

　　2 结果

　　2?1 小鼠脾脏、胸腺系数测定(表1) 表1 甲醛对小鼠脾脏、胸腺系数的影响(略)注：与阴性对照组比较，* P0?05，** P0?01
　　从表1可知，各甲醛染毒剂量组小鼠脾脏、胸腺系数随染毒剂量升高呈明显下降趋势，除1?mg/m3染毒组脾脏系数与对照组比较差异无统计学意义外，其他各染毒剂量组与对照组比较，差异均有统计学意义(P0?05或P0?01)。

　　2?2 甲醛对小鼠脾脏、胸腺CD3、CD4、CD8含量的影响(表2、表3) 表2 甲醛对小鼠脾脏CD3、CD4、CD8的影响(略)注：与阴性对照组比较，* P0?05，** P0?01 表3 甲醛对小鼠胸腺CD3、CD4、CD8的影响(略)注：与阴性对照组比较，* P0?05，** P0?01