紫外分光光度法测定鹰嘴豆和豆芽中异黄酮含量的研究(一)

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作者：程珍 阿依古力・阿不列孜 马庆玲 高艳华 阿吉艾克拜尔・艾萨

【摘要】 目的建立一种检测鹰嘴豆异黄酮含量的快速分析方法，并检测鹰嘴豆和豆芽中异黄酮的含量。方法采用紫外分光光度法，检测波长为260.9 nm，测定鹰嘴豆及其豆芽中异黄酮的含量测定。结果鹰嘴豆芽素A在2～30 μg/ml范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系，以黄酮总含量测定结果重复性RSD=1.95%，加样回收率为100.18%。结论为鹰嘴豆提取物及制品提供一种简单、可靠、有效的测定方法。

【关键词】 鹰嘴豆 豆芽 异黄酮 紫外分光光度

鹰嘴豆是豆科鹰嘴豆属鹰嘴豆Cicer afiefinum L．的成熟种子，为一年生栽培植物，维吾尔语称其为诺胡提(音译)，主要种植在新疆、甘肃等地区，是维吾尔族人常用的药食两用的食品，有治疗糖尿病、高脂血症、支气管炎、性欲降低等疾病的作用。

有关鹰嘴豆中异黄酮的报道不多，谭永霞等〔1〕从鹰嘴豆中分离得到异黄酮，关于鹰嘴豆异黄酮的含量测定及其方法均未见报道。本研究用自制的鹰嘴豆芽素A为标准品，在紫外最大吸收峰260.9 nm处测定了鹰嘴豆和其豆芽异黄酮含量，豆芽中异黄酮含量达到5.057%，并确定了鹰嘴豆异黄酮含量测定方法。

1 材料与仪器

鹰嘴豆为木垒县产的“Desi”品种，豆芽经常规发芽得到，鹰嘴豆豆芽素A对照品为本实验室分离制备；试剂均为分析纯。

SHIMADZU UV-2550型分光光度计；戴安P680高效液相色谱仪；UVD170u型紫外检测器；Chromeleon型色谱工作站；超声波清洗器（KQ-250B型）；电子天平（SEJ180-4型）。

2 方法

2.1 样品液的制备精确称取2.0 g鹰嘴豆粉和干燥后的鹰嘴豆豆芽粉(过25目筛)，每一样品平行作两份，溶于20 ml的甲醇中，采用超声波提取3次，功率为59 kHz，温度为25℃ ，提取时间为45 min，过滤，合并滤液，测定吸收值，每一样品测3次，取6个测定的吸收值均值为该样品的吸收值。

2.2 标准品的制备和标准溶液的配制

2.2.1 标准品的制备鹰嘴豆豆芽提取物经硅胶柱、SephadexLH20层析后得到化合物，再经制备HPLC进一步纯化，归一法其纯度为98.96%，经1H-NMR，13C-NMR结构鉴定：黄色针状结晶，mp 216～217℃(CH3OH)。 H-NMR(DMSO-d6)6： 8．35(1H，s，H-2)，7．49(2H，d，J=8．4 Hz，H-2 ，6 )，6．99(2H，d，J=8．7 Hz，H-3 ，5 )，6．41(1H，d，J=2．1 Hz，H-8)，6．24(1H，d，J=1．8 Hz，H-6)，3．78(3H，s，OCH3)；13C-NMR(DMSO-d6)6：154．4(C-2)，122．7(C-3)，179．9(C-4)，161．5(C-5)，98．7(C-6)，163．9(C-7)，93．6(C-8)，157．5(C-9)，104．3(C-10)，121．9(C-1 )，130．0(C-2 )，113．6(C-3 )，159．0(C-4 )，113．6(C-5 )，130．0(C-6 )，55．0(OCH3)。以上数据与文献〔2〕一致，故鉴定化合物为鹰嘴豆芽素A(biochanin A)。

HPLC制备色谱条件：ODS-A色谱柱（250 mm×20 mm，5 μm）；流动相MeOH-H2O（80∶20）；进样量 1 ml；流速7 ml/min；检测波长260 nm。色谱图见图1。

图1 标准品鹰嘴豆芽素A的HPLC图

2.2.2 标准溶液的配置精确称取已纯化的鹰嘴豆芽素A标准品5.0 mg，置于25 ml容量瓶中，以甲醇溶解，并定容至刻度，摇匀，浓度为200 μg/ml。

2.3 波长的选择分别取一定浓度的标准溶液和样品液，在波长为200～400 nm的紫外区范围进行扫描，测定参数为Abs，中速，采样间隔为1 nm，记录范围-1.638～4.000，根据紫外吸收光谱图确定其测定波长。