刺五加注射液对Hela细胞抑制作用的实验研究(一)

详细内容

【摘要】 目的：探讨刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela体外增殖的抑制作用。方法：采用MTT法测定了不同浓度的刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的体外抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态变化。结果：刺五加注射液浓度越高对Hela细胞抑制作用越好，作用时间越长抑制效果越强，量效关系和时效关系良好；形态学观察到细胞凋亡。结论：刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖有较强的抑制作用。

【关键词】 刺五加；宫颈肿瘤；Hela细胞；细胞凋亡

【ABSTRACT】 Objective:To study the inhibitory action of Acanthopanax injection on human cervical cancer cells for Hela growth.Methods:MTT assay was used to determine the human cervical cancer cells for Hela growth and inhibitory rates with various concentrations of Acanthopanax injection,then the changes of cells? shape with upside-down microscope(was observed).Results:The higher concentration of Acanthopanax injection was,the stronger inhibitory function to Hela was.The inhibitory effect was observed stronger with the concentration increasing and time prolonging.Morphological observation showed cell apoptosis.Conclusion:Acanthopanax injection has stronger inhibitory function on the growth of tumor cells Hela.

【KEY WORDS】 ACANTHOPANAX SENTICOSUS;Uterine Cervical Neoplasms;Hela cells;Apoptosis

在世界范围内，宫颈癌(cervical cancer)是妇女第二大常见恶性肿瘤。在一些发展中国家，是妇女的头号死因。目前临床治疗主要采取手术和放化疗，此外中西医结合法也是普遍采用的方案。中医治疗肿瘤具体法则很多，由于肿瘤患者绝大多数属本虚标实之候，故采用扶正培本法相对较多。扶正培本法的目的主要在于抑癌抗癌、提高机体免疫力、减轻放化疗的毒副作用等。常用中药有灵芝、天花粉、枸杞、黄芪、党参、人参、刺五加、鳖甲等。刺五加的化学成分复杂，主要活性成分为刺五加苷和刺五加多糖，《神农本草经》把五加类药物列为上品，有“补中、益精、坚筋骨、强意志”的功效〔1，2〕；而现代医学研究表明刺五加具有扩张血管、抗疲劳、抗应激、抗炎的作用，有利于组织的修复〔3，4〕。笔者测定了4种不同剂量的刺五加注射液对人宫颈癌细胞株Hela的抑制作用，探讨其量效关系和时效关系，为刺五加抗肿瘤的深入研究及今后的临床应用提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 材料 刺五加注射液（黑龙江省完达山制药厂，国药准字Z23020810）；人宫颈癌细胞株Hela，由河北农业大学生命科学院提供。

1.2 仪器和试剂 CO2培养箱（美国SHELDON公司）；净化工作台（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司）；酶标仪（郑州博塞生物工程公司）；倒置显微镜（上海光学仪器五厂）；96孔培养板（美国Costar公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；DMEM培养液和胰蛋白酶（GIBCO公司）；顺铂（齐鲁制药有限公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）（美国Sigma公司）。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 将Hela细胞贴壁生长于DMEM完全培养液体系（含10% 胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/mL），置于37℃，饱和湿度，5%CO2的培养箱中进行培养，待细胞长至对数生长期时用DMEM完全培养基将细胞浓度调整为1×105 个/mL的细胞悬液待用。

1.3.2 MTT法检测刺五加注射液对Hela细胞增殖的抑制作用 按1×105 个/mL的细胞密度将Hela细胞接种到96孔培养板中，终体积为每孔200μL，分组加入相应药物，空白对照组加生理盐水，实验组加入不同剂量的刺五加注射液，分别为每孔10μL，20μL，40μL，80μL，并设4个平行孔，分别培养24ｈ、48ｈ和72ｈ后加入MTT液（5μg/μL）20μL，继续培养4ｈ，弃上清液，加入二甲亚砜（DMSO）每孔150μL，震荡15min，测定吸光度值（OD值），测定波长λ=570nm，参考波长λ=630nm，计算抑制率（Grow inhibitory rate,GIR）：

抑制率（%）=（对照组OD值-实验组OD值）/对照组OD值×100%

1.3.3 形态学观察 取对数生长期的Hela细胞接种于48孔细胞培养板内，培养24 h，实验组每孔加入20 μL的刺五加注射液，对照组加入生理盐水，培养48 h后在倒置显微镜下观察细胞的形态变化。